[發明專利]一種能夠檢測新冠病毒并同時鑒別變異體的試劑盒及鑒別方法

在審

• 申請號: 202110789385.4
• 申請日: 2021-07-13
• 公開（公告）號: CN113504376A
• 公開（公告）日: 2021-10-15
• 發明（設計）人: 李小平;陳啟;陳夢棋;沈雯琪;任艷麗;余銘恩
• 申請（專利權）人: 浙江樹人學院（浙江樹人大學）
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 杭州知見專利代理有限公司 33295
• 代理人: 趙越劍

1.一種能夠檢測新冠病毒并同時鑒別變異體的試劑盒，其特征在于，包括采集管、酶解管、緩沖液瓶和用于檢測新冠病毒并同時鑒別變異體的標準多肽，所述標準多肽的序列包括以下四條多肽：DIADTTDAVR，DIDDTTDAVR，FDNPVLPFNDGVYFASTEK，FANPVLPFNDGVYFASTEK。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述采集管內裝保存液，保存液組成及規格為：100mmol/l的二硫蘇糖醇溶液和100mmol/l的碳酸氫銨；200μL/管。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述酶解管內裝凍干粉，制備方法為：配制碘代乙酰胺300mmol/l與堿性胰蛋白酶1mg/ml的混合液，取100μL混合液分裝在EP管中，冷凍干燥。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述緩沖液瓶的組成及規格為：100mmol/l的碳酸氫銨，10ml/瓶。

5.一種非醫學用途的鑒別新冠病毒變異體的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)試樣保存：將試樣投入含有200μL保存液的采集管中保存；

(2)液相色譜串聯質譜檢測：將采集管在50℃水浴鍋中孵育30分鐘后離心，取上清液100μl加入復溶后的酶解管中，在37℃水浴鍋中孵育30分鐘后，用5μl甲酸終止反應，上機檢測，以標準多肽作為陽性對照與試樣采用相同的上機檢測參數檢測，所述標準多肽的包括以下四條多肽：DIADTTDAVR，DIDDTTDAVR，FDNPVLPFNDGVYFASTEK，FANPVLPFNDGVYFASTEK；

(3)結果分析：

若DIADTTDAVR陰性，DIDDTTDAVR陽性，FDNPVLPFNDGVYFASTEK陽性，FANPVLPFNDGVYFASTEK陰性，則鑒定為未變異新冠病毒；

若DIADTTDAVR陽性，DIDDTTDAVR陰性，FDNPVLPFNDGVYFASTEK陽性，FANPVLPFNDGVYFASTEK陰性，則鑒定為B.1.1.7變異新冠病毒；

若DIADTTDAVR陽性，DIDDTTDAVR陰性，FDNPVLPFNDGVYFASTEK陰性，FANPVLPFNDGVYFASTEK陽性，則鑒定為501Y.V2變異新冠病毒。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，液相色譜條件：

色譜柱：Waters BEH 300C18，規格100mm×2.1mm，粒徑1.7μm；

柱溫：40℃；樣品溫度：室溫；

流動相：流動相A：含0.1％甲酸的水溶液；流動相B：含0.1％甲酸的乙腈溶液；

色譜分離梯度條件：在5分鐘內將流動相B含量從3％提升至32％；

流速：0.3mL/min；

進樣體積：5μL。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，質譜條件：

ESI+離子源，毛細管電壓：3.0kv，錐孔電壓：15V，脫溶劑溫度：500℃，脫溶劑氣流量：900L/min，錐孔反吹氣流量：150L/hr，碰撞室壓力：3.0×10-3mbar；低端分辨率1：2.5V，高端分辨率1：15.0V，離子能量1：0.5eV；低端分辨率2：2.8V，高端分辨率2：15.0V，離子能量2：1.0eV；離子源溫度：150℃，提取器電壓：3.0V；監測模式采用多反應檢測模式MRM。

8.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，保存液組成為：100mmol/l的二硫蘇糖醇溶液和100mmol/l的碳酸氫銨。

9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，復溶后的酶解管為將100μl緩沖液加入到酶解管中，使酶解管中的凍干粉復溶；凍干粉制備方法為：配制碘代乙酰胺300mmol/l與堿性胰蛋白酶1mg/ml的混合液，取100μL混合液分裝在EP管中，冷凍干燥。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述緩沖液為100mmol/l的碳酸氫銨。