[發明專利]一種同時定量檢測血清中3種急性心肌梗死相關microRNA熒光探針的制備方法

在審

• 申請號: 202110789084.1
• 申請日: 2021-07-13
• 公開（公告）號: CN113373216A
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發明（設計）人: 胡琴;程霞;岑瑤;許貫虹;魏芳弟
• 申請（專利權）人: 南京邁迪森亞生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12Q1/682
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹翠珍

1.一種同時定量檢測血清中3種急性心肌梗死相關microRNA熒光探針的制備方法，其特征在于，步驟如下：

(1)、合成金屬有機骨架Fe-MIL-88；

(2)、制備發夾探針H1,H2,H3,H4,H5,H6,H7,H8,H9：將H1-H9于95℃反應，然后自然冷卻至室溫；

(3)、制備熒光探針：將步驟(2)所得的發夾探針與步驟(1)所得的Fe-MIL-88混合，發夾探針上標記的FAM(H1-H3),TAMRA(H4-H6),Cy5(H7-H9)的熒光被猝滅，隨著目標物的加入，520nm處FAM的熒光隨著目標物microRNA-21濃度逐漸增加而逐漸增強，580nm處TAMRA的熒光隨著目標物microRNA-499濃度逐漸增加而逐漸增強，680nm處Cy5的熒光隨著目標物microRNA-133a濃度逐漸增加而逐漸增強；

(4)、根據熒光強度對相應目標物的濃度繪制標準曲線；

(5)、根據標準曲線，獲得樣品中microRNA-21,microRNA-499,microRNA-133a的濃度，完成對3種microRNA的定量檢測。

2.根據權利要求1所述的一種同時定量檢測血清中3種急性心肌梗死相關microRNA熒光探針的制備方法，其特征在于：步驟(1)中，金屬有機骨架Fe-MIL-88的紫外吸收波長為400-800nm。

3.根據權利要求1所述的一種同時定量檢測血清中3種急性心肌梗死相關microRNA熒光探針的制備方法，其特征在于：步驟(3)中，發夾探針與Fe-MIL-88培育時間為0-40min且大于0。

4.根據權利要求1所述的一種同時定量檢測血清中3種急性心肌梗死相關microRNA熒光探針的制備方法，其特征在于：步驟(3)中，目標物與發夾探針培育時間為0-120min且大于0。

5.根據權利要求1所述的一種同時定量檢測血清中3種急性心肌梗死相關microRNA熒光探針的制備方法，其特征在于：步驟(3)中，Fe-MIL-88濃度為175-525μg/mL。

6.根據權利要求1所述的一種同時定量檢測血清中3種急性心肌梗死相關microRNA熒光探針的制備方法，其特征在于：步驟(4)中，根據520nm處熒光強度對microRNA-21的濃度繪制標準曲線，根據580nm處熒光強度對microRNA-499的濃度繪制標準曲線，根據680nm處熒光強度對microRNA-133a的濃度繪制標準曲線。