[發明專利]一種抗體納米粒子及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110788149.0
• 申請日: 2021-07-13
• 公開（公告）號: CN113855788A
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發明（設計）人: 張慶;吳戀;李響敏;張青;劉少正;陳慶杰
• 申請（專利權）人: 南昌大學第一附屬醫院
• 主分類號: A61K38/44
• 分類號: A61K38/44;A61K39/395;A61K41/00;A61K47/42;A61K47/60;A61K47/68;A61K47/69;A61P15/08;A61P35/00;A61P35/04;B82Y5/00;B82Y30/00;C07K16/32;C07K16/2
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 馬叢

本發明提供了一種抗體納米粒子及其制備方法和應用，屬于醫藥技術領域。本發明提供的抗體納米粒子，包括聚乙二醇化抗HER?2納米抗體和與所述聚乙二醇化抗HER?2納米抗體通過化學鍵合的HCC納米顆粒；所述HCC納米顆為人血清白蛋白封裝的二氫卟吩和過氧化氫酶。本發明提供的抗體納米粒子實現了光敏劑的深部腫瘤靶向傳遞，能夠誘導催化供氧并降低SK?OV?3細胞中HIF?1α的表達，改善腫瘤乏氧微環境，誘導DCs成熟，在660nm激光下，基于抗體納米粒子的PDT與抗CTLA?4治療可以抑制遠處卵巢癌腫瘤的生長，防止腫瘤轉移。

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及一種抗體納米粒子及其制備方法和應用。

背景技術

卵巢癌是女性生殖系統的一種惡性腫瘤，發病率和死亡率都很高。目前，卵巢癌的主要治療方案是化療、放療和手術治療；然而，上述方法的局限性是容易復發，從而降低了患者的生存期。乏氧是實體瘤的典型特征，乏氧有助于卵巢癌的腫瘤侵襲和轉移，還會增加線粒體裂變程度，降低卵巢癌細胞對化療藥物如順鉑的敏感性，從而導致對放療、化療的抵抗，從而直接限制多種臨床腫瘤治療方案的療效。

光動力療法(PDT)治療卵巢等腫瘤的新興療法，具有諸多優點，主要包括兩個過程：首先把光敏劑輸送到腫瘤位置；然后用特定波長的光來激發光敏劑，將能量傳遞給周圍的分子氧，產生細胞毒性活性氧(Reactive oxygen species，ROS)，能夠對腫瘤細胞和微血管造成不可逆的損傷，繼而引發大量的炎癥和免疫反應，這種連鎖機制能夠實現對腫瘤的長期抑制作用。但存在以下問題：既往的光敏劑對深部腫瘤的靶向性差，副作用較大；光傳播深度有限；腫瘤內普遍存在的乏氧會減弱PDT的治療效果并加重治療后的乏氧。開發改善腫瘤乏氧、靶向腫瘤成像與治療一體化的納米探針是解決上述問題的方法之一。

納米抗體(Nb)是一種天然單域抗體，是目前已知最小的功能性抗原特異性結合片段，易于通過基因工程生產。Nb在室溫下具有高特異性、高親和力、低免疫原性、高溶解性和高穩定性、組織滲透能力強，從而提高藥物遞送系統的功效。與傳統抗體相比，Nb在靶向藥物傳遞和腫瘤靶向方面具有優勢，具有巨大的臨床應用潛力，可以提高PDT中靶向深部組織腫瘤的性能。但是Nb血液清除速度快，限制了治療應用，聚乙二醇化和與納米顆粒結合是延長其血液半衰期的方法之一。HER2在大多數上皮性卵巢癌中呈過度表達，因此抗HER2-Nb結合光敏劑可以提高位于盆腔深部的卵巢癌的靶向性。

腫瘤的缺氧微環境是一個復雜的因素，它可能介導腫瘤對各種治療應用的抵抗力。現有的光動力療法用傳統的光敏劑治療后會加劇腫瘤的缺氧環境，對于卵巢癌腫瘤細胞的PDT治療效果有限。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種抗體納米粒子及其制備方法和應用，本發明提供的抗體納米粒子可以改善腫瘤乏氧和促進免疫原性光動力療法治療卵巢癌，對于卵巢癌腫瘤細胞抑制效果優異。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種抗體納米粒子，包括聚乙二醇化抗HER-2納米抗體和與所述聚乙二醇化抗HER-2納米抗體通過化學鍵合的HCC納米顆粒；

所述HCC納米顆為人血清白蛋白封裝的二氫卟吩和過氧化氫酶；

所述聚乙二醇化抗HER-2納米抗體由包括以下步驟的方法制備得到：構建質粒，將所述質粒轉化到大腸桿菌Rosetta-gami^TM 2感受態細胞中誘導蛋白質表達，得到納米抗體；所述質粒為N端為具有His6標簽，C端為GGGGS-CCC-GSGSGS-LLQS序列的質粒，所述序列中包含未配對的半胱氨酸和微生物轉谷氨酰胺酶結合的LLQS；將微生物轉谷氨酰胺酶添加到含有所述納米抗體、抗壞血酸和PEG-NH₂的磷酸鹽緩沖溶液中，啟動Nb的位點特異性聚乙二醇化，得到聚乙二醇化抗HER-2納米抗體。

優選的，所述啟動Nb的位點特異性聚乙二醇化后還包括純化，所述純化包括：利用α-氨基乙硫醇鹽酸鹽預處理后進行純化。