[發(fā)明專(zhuān)利]一種抗體納米粒子及其制備方法和應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110788149.0
• 申請(qǐng)日: 2021-07-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113855788A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-12-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張慶;吳戀;李響敏;張青;劉少正;陳慶杰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): A61K38/44
• 分類(lèi)號(hào): A61K38/44;A61K39/395;A61K41/00;A61K47/42;A61K47/60;A61K47/68;A61K47/69;A61P15/08;A61P35/00;A61P35/04;B82Y5/00;B82Y30/00;C07K16/32;C07K16/2
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 馬叢

1.一種抗體納米粒子，包括聚乙二醇化抗HER-2納米抗體和與所述聚乙二醇化抗HER-2納米抗體通過(guò)化學(xué)鍵合的HCC納米顆粒；

所述HCC納米顆為人血清白蛋白封裝的二氫卟吩和過(guò)氧化氫酶；

所述聚乙二醇化抗HER-2納米抗體由包括以下步驟的方法制備得到：構(gòu)建質(zhì)粒，將所述質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌Rosetta-gami^TM 2感受態(tài)細(xì)胞中誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表達(dá)，得到納米抗體；所述質(zhì)粒為N端為具有His6標(biāo)簽，C端為GGGGS-CCC-GSGSGS-LLQS序列的質(zhì)粒，所述序列中包含未配對(duì)的半胱氨酸和微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶結(jié)合的LLQS；將微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶添加到含有所述納米抗體、抗壞血酸和PEG-NH₂的磷酸鹽緩沖溶液中，啟動(dòng)Nb的位點(diǎn)特異性聚乙二醇化，得到聚乙二醇化抗HER-2納米抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體納米粒子，其特征在于，所述啟動(dòng)Nb的位點(diǎn)特異性聚乙二醇化后還包括純化，所述純化包括：利用α-氨基乙硫醇鹽酸鹽預(yù)處理后進(jìn)行純化。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗體納米粒子，其特征在在于，所述抗體納米粒子中HCC納米顆粒的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80～95％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體納米粒子，其特征在在于，所述HCC納米顆粒中二氫卟吩、過(guò)氧化氫酶和人血清白蛋白的質(zhì)量比為0.5～1.5：0.5～1.5：3～5。

5.權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)所述的抗體納米粒子的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

構(gòu)建質(zhì)粒，將所述質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到大腸桿菌Rosetta-gami^TM 2感受態(tài)細(xì)胞中誘導(dǎo)蛋白質(zhì)表達(dá)，得到納米抗體；所述質(zhì)粒為N端為具有His6標(biāo)簽，C端為GGGGS-CCC-GSGSGS-LLQS序列的質(zhì)粒，所述序列中包含未配對(duì)的半胱氨酸和微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶結(jié)合的LLQS；

將微生物轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶添加到含有所述納米抗體、抗壞血酸和PEG-NH₂的磷酸鹽緩沖溶液中，啟動(dòng)Nb的位點(diǎn)特異性聚乙二醇化后純化，得到聚乙二醇化抗HER-2納米抗體；

將人血清白蛋白、谷胱甘肽和水混合，去除水后加入二氫卟吩和過(guò)氧化氫酶進(jìn)行偶聯(lián)，然后加入乙醇形成二硫鍵，得到HCC納米顆粒；

利用5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)對(duì)HCC納米顆粒進(jìn)行活化，得到活化HCC納米顆粒；

將所述聚乙二醇化抗HER-2納米抗體和活化HCC納米顆粒進(jìn)行化學(xué)鍵合，得到抗體納米粒子。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述HCC納米顆粒與5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)的質(zhì)量比為1：2～4。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述聚乙二醇化抗HER-2納米抗體和活化HCC納米顆粒的質(zhì)量比為1：0.7～0.9。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述化學(xué)鍵合的溫度為10～30℃，時(shí)間為2～4h。

9.權(quán)利要求1～4任一項(xiàng)所述的抗體納米粒子或權(quán)利要求5～8任一項(xiàng)所述制備方法得到的抗體納米粒子在制備治療卵巢腫瘤藥物中的應(yīng)用。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述治療卵巢腫瘤藥物包括光動(dòng)力療法治療卵巢腫瘤藥物和/或免疫療法治療卵巢腫瘤藥物。