[發明專利]一種抗體納米粒子及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110788149.0
• 申請日: 2021-07-13
• 公開（公告）號: CN113855788A
• 公開（公告）日: 2021-12-31
• 發明（設計）人: 張慶;吳戀;李響敏;張青;劉少正;陳慶杰
• 申請（專利權）人: 南昌大學第一附屬醫院
• 主分類號: A61K38/44
• 分類號: A61K38/44;A61K39/395;A61K41/00;A61K47/42;A61K47/60;A61K47/68;A61K47/69;A61P15/08;A61P35/00;A61P35/04;B82Y5/00;B82Y30/00;C07K16/32;C07K16/2
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 馬叢

1.一種抗體納米粒子，包括聚乙二醇化抗HER-2納米抗體和與所述聚乙二醇化抗HER-2納米抗體通過化學鍵合的HCC納米顆粒；

所述HCC納米顆為人血清白蛋白封裝的二氫卟吩和過氧化氫酶；

所述聚乙二醇化抗HER-2納米抗體由包括以下步驟的方法制備得到：構建質粒，將所述質粒轉化到大腸桿菌Rosetta-gami^TM 2感受態細胞中誘導蛋白質表達，得到納米抗體；所述質粒為N端為具有His6標簽，C端為GGGGS-CCC-GSGSGS-LLQS序列的質粒，所述序列中包含未配對的半胱氨酸和微生物轉谷氨酰胺酶結合的LLQS；將微生物轉谷氨酰胺酶添加到含有所述納米抗體、抗壞血酸和PEG-NH₂的磷酸鹽緩沖溶液中，啟動Nb的位點特異性聚乙二醇化，得到聚乙二醇化抗HER-2納米抗體。

2.根據權利要求1所述的抗體納米粒子，其特征在于，所述啟動Nb的位點特異性聚乙二醇化后還包括純化，所述純化包括：利用α-氨基乙硫醇鹽酸鹽預處理后進行純化。

3.根據權利要求1或2所述的抗體納米粒子，其特征在在于，所述抗體納米粒子中HCC納米顆粒的質量分數為80～95％。

4.根據權利要求1所述的抗體納米粒子，其特征在在于，所述HCC納米顆粒中二氫卟吩、過氧化氫酶和人血清白蛋白的質量比為0.5～1.5：0.5～1.5：3～5。

5.權利要求1～4任一項所述的抗體納米粒子的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

構建質粒，將所述質粒轉化到大腸桿菌Rosetta-gami^TM 2感受態細胞中誘導蛋白質表達，得到納米抗體；所述質粒為N端為具有His6標簽，C端為GGGGS-CCC-GSGSGS-LLQS序列的質粒，所述序列中包含未配對的半胱氨酸和微生物轉谷氨酰胺酶結合的LLQS；

將微生物轉谷氨酰胺酶添加到含有所述納米抗體、抗壞血酸和PEG-NH₂的磷酸鹽緩沖溶液中，啟動Nb的位點特異性聚乙二醇化后純化，得到聚乙二醇化抗HER-2納米抗體；

將人血清白蛋白、谷胱甘肽和水混合，去除水后加入二氫卟吩和過氧化氫酶進行偶聯，然后加入乙醇形成二硫鍵，得到HCC納米顆粒；

利用5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)對HCC納米顆粒進行活化，得到活化HCC納米顆粒；

將所述聚乙二醇化抗HER-2納米抗體和活化HCC納米顆粒進行化學鍵合，得到抗體納米粒子。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述HCC納米顆粒與5,5'-二硫代雙(2-硝基苯甲酸)的質量比為1：2～4。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述聚乙二醇化抗HER-2納米抗體和活化HCC納米顆粒的質量比為1：0.7～0.9。

8.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述化學鍵合的溫度為10～30℃，時間為2～4h。

9.權利要求1～4任一項所述的抗體納米粒子或權利要求5～8任一項所述制備方法得到的抗體納米粒子在制備治療卵巢腫瘤藥物中的應用。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述治療卵巢腫瘤藥物包括光動力療法治療卵巢腫瘤藥物和/或免疫療法治療卵巢腫瘤藥物。