[發明專利]一種用于人磷酸化血管擴張刺激磷蛋白光激化學發光均相免疫檢測試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 202110787339.0
• 申請日: 2021-07-13
• 公開（公告）號: CN113238062B
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 劉丹;陳立波
• 申請（專利權）人: 湖南菲思特精準醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/531;G01N33/58;G01N21/76
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1.一種人磷酸化血管擴張刺激磷蛋白光激化學發光均相免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括含鏈霉親和素與供體結合物的組份SA-GG、含生物素與VASP-P抗體Ⅰ的結合物的組份Bio-Ab、含VASP-P抗體Ⅱ與受體結合物的組份FG-Ab、樣本前處理緩沖液、含前列腺素E1的樣本激活劑和含前列腺素E1和ADP的樣本抑制劑，所述組份Bio-Ab含與生物素結合的VASP-P抗體Ⅰ，所述與生物素結合的VASP-P抗體Ⅰ為自制備鼠單抗，鼠單抗重鏈可變區氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.2 所示，鼠單抗輕鏈可變區氨基酸序列如序列表SEQID NO.4所示，VASP-P抗體Ⅱ是在239絲氨酸位置磷酸化的VASP。

2.根據權利要求1所述的人磷酸化血管擴張刺激磷蛋白光激化學發光均相免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述組份SA-GG含有與鏈霉親和素結合的能夠在激發狀態產生單線態氧的供體，所述供體為填充有感光化合物的高分子微粒，直徑為180-220nm。

3.根據權利要求1所述的人磷酸化血管擴張刺激磷蛋白光激化學發光均相免疫檢測試劑盒，其特征在于，所采用的免疫原為人工合成序列如序列表SEQ ID NO.5所示。

4.根據權利要求1所述的人磷酸化血管擴張刺激磷蛋白光激化學發光均相免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述組份FG-Ab含與VASP-P抗體Ⅱ結合的與單線態氧反應生成可檢測信號的受體，所述受體為填充有發光化合物和鑭系元素的高分子微粒，直徑為180-220nm。

5.根據權利要求1所述的人磷酸化血管擴張刺激磷蛋白光激化學發光均相免疫檢測試劑盒，其特征在于，所述組份Bio-Ab中VASP-P抗體Ⅰ能夠與血管擴張刺激磷蛋白的第一表位特異性結合，組份FG-Ab中VASP-P抗體Ⅱ能夠與血管擴張刺激磷蛋白的第二表位特異性結合，且所述第二表位和所述第一表位不相重疊。

6.一種采用權利要求1~5任一項所述的人磷酸化血管擴張刺激磷蛋白光激化學發光均相免疫檢測試劑盒的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括如下步驟：

a）樣本前處理：取樣本激活劑干粉和樣本抑制劑干粉分別用樣本前處理劑溶解后，分別取10μl加入等體積的全血待測樣本或校準品，混勻，室溫孵育10min；

b）孵育后加入等體積的組份FG-Ab和組份Bio-Ab，孵育，進行第一步反應；再加入組份SA-GG進行第二步反應；

c）激光照射反應孔，測量每個反應孔的光信號值。

7.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述組份SA-GG采用如下步驟制備：感光顆粒和鏈霉親和素10:1的比例加入0.1M 2-（N-嗎啉）乙磺酸MES緩沖液，37℃反應避光震蕩48小時。

8.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述組份Bio-Ab采用如下步驟制備：將VASP-P抗體Ⅰ加入碳酸鈉緩沖液中，加入活化生物素，37℃反應12-18小時后，進行透析，透析結束后加入Tris-Hcl緩沖液進行懸浮和保存。

9.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述組份FG-Ab采用如下步驟制備：將受體加入碳酸鈉緩沖液中，加入VASP-P抗體Ⅱ，迅速斡旋混勻，37℃避光反應，加入含75mg/ml Gly的碳酸鹽緩沖液，去液體，得到VASP-P抗體Ⅱ和受體的結合物，加入Tris緩沖液進行重懸即為組份FG-Ab。

10.根據權利要求6所述的檢測方法，其特征在于，所述含前列腺素E1的樣本激活劑和所述含前列腺素E1+ADP的樣本抑制劑使用時采用樣本前處理緩沖液稀釋至2-20μmol/L。