[發(fā)明專利]一種用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合、試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110785623.4
• 申請日: 2021-07-12
• 公開（公告）號: CN113337619B
• 公開（公告）日: 2022-12-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉立兵;王建昌;孫曉霞;付琦;王金鳳;婁巧哲
• 申請（專利權(quán)）人: 石家莊海關(guān)技術(shù)中心
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 河北國維致遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 13137
• 代理人: 任青

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體公開一種用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合、試劑盒及其應(yīng)用。所述用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針中，上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示，探針的序列如SEQ ID NO:3所示。利用本發(fā)明的引物和探針的組合，可實現(xiàn)對藍圓鰺源成分的準確檢測，且上述引物和探針組合的特異性強、靈敏度高，靈敏度可達到14pg/μL，同時，檢測的準確度高，能夠?qū)崿F(xiàn)對藍圓鰺源成分的快速檢測，對于防止敏感人群食入藍圓鰺魚肉制品后過敏現(xiàn)象的發(fā)生具有重要意義，具有較高的實用價值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合、試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

藍圓鰺(Decapterus maruadsi)屬于脊索動物門(Chordata)、硬骨魚綱(Osteichthyes)、鱸形目(Perciformes)，鲹科(Carangidae)，圓鲹屬(Decapterus)的一種。藍圓鰺具有高蛋白、低脂肪、礦物質(zhì)含量豐富等特點，是我國重要的經(jīng)濟魚類之一，其體內(nèi)還有含有人體所需的多種氨基酸、維生素以及錳、鐵、鋅等豐富的微量元素，也是一種優(yōu)質(zhì)的動物性蛋白魚類。藍圓鰺的主要特點是形體較小，頭和內(nèi)臟所占的比例相對較大，生長速度快，但肉質(zhì)極易腐爛變質(zhì)，目前主要以鮮銷為主，其加工制品主要集中在加工成咸干品、動物飼料以及休閑食品、調(diào)味品，魚糜制品等。由于其體內(nèi)含有豐富的游離組氨酸，并存在產(chǎn)組胺的微生物，在適宜條件下極易產(chǎn)生組胺，藍圓鰺還屬于高組胺魚類。食入高組胺魚肉后，敏感人群會表現(xiàn)為皮疹、蕁麻疹、嘔吐、頭痛等癥狀，常被稱為“組胺中毒”。因此，建立一種準確定量檢測魚肉制品中藍圓鰺源性成分的方法，對于防止敏感人群食入藍圓鰺魚肉制品后過敏現(xiàn)象的發(fā)生具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于此，本發(fā)明提供一種用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合、試劑盒及其應(yīng)用，特異性好，靈敏度高，能準確快速的檢測出魚肉制品中是否含有藍圓鰺源性成分。

為達到上述發(fā)明目的，本發(fā)明實施例采用了如下的技術(shù)方案：

一種用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合，包括引物對和探針，所述引物對的序列如下：

上游引物-F：5'-TGGCCTTCCCTCGAATGA-3'(SEQ ID NO:1)；

下游引物-R：5'-CGGCCCCGGCTTCA-3'(SEQ ID NO:2)；

所述探針的序列如下：5'-CTTCTGACTACTCCCTCCGTCCTTCCTGC-3'(SEQ ID NO:3)。

相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供的用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合具有以下優(yōu)勢：

本申請以藍圓鰺線粒體細胞色素c氧化酶亞基I(cox I)基因序列為基礎(chǔ)，特異性設(shè)計引物對和探針，能夠特異性結(jié)合到藍圓鰺源模板DNA上，準確檢測出藍圓鰺源成分，且與鱈魚、羅非魚、鲅魚、巴沙魚、金槍魚、鯉魚、三文魚、低眼巨鯰等均無交叉擴增反應(yīng)，特異性強；且上述引物和探針組合的靈敏度高，對藍圓鰺源性成分DNA的靈敏度達到14pg/μL，能夠?qū)崿F(xiàn)對藍圓鰺源成分的快速檢測，同時檢測的準確度高，用時短，且無需特殊的儀器和專業(yè)的操作人員，可實現(xiàn)在非實驗室條件下快速檢測出藍圓鰺源成分，對于防止敏感人群食入藍圓鰺魚肉制品后過敏現(xiàn)象的發(fā)生具有重要意義，具有較高的實用價值。

優(yōu)選的，所述探針的5'端修飾有熒光素，3'端修飾有熒光猝滅基團。

優(yōu)選的，所述探針為：5'-FAM-CTTCTGACTACTCCCTCCGTCCTTCCTGC-Eclipse-3'。

本發(fā)明還提供了上述用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合在非診斷性檢測魚肉制品中藍圓鰺源成分中的應(yīng)用。