[發明專利]一種用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合、試劑盒及其應用有效
| 申請號： | 202110785623.4 | 申請日： | 2021-07-12 |
| 公開（公告）號： | CN113337619B | 公開（公告）日： | 2022-12-02 |
| 發明（設計）人： | 劉立兵;王建昌;孫曉霞;付琦;王金鳳;婁巧哲 | 申請（專利權）人： | 石家莊海關技術中心 |
| 主分類號： | C12Q1/6888 | 分類號： | C12Q1/6888;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 河北國維致遠知識產權代理有限公司 13137 | 代理人： | 任青 |
| 地址： | 050051 河*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 藍圓鰺源 成分 檢測 引物 探針 組合 試劑盒 及其 應用 | ||
1.一種用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合，其特征在于：包括引物對和探針，所述引物對的序列如下：
上游引物-F：5'-TGGCCTTCCCTCGAATGA-3'；
下游引物-R：5'-CGGCCCCGGCTTCA-3'；
所述探針-P的序列如下：5'-CTTCTGACTACTCCCTCCGTCCTTCCTGC-3'；
其中，所述探針的5'端修飾有熒光素，3'端修飾有熒光猝滅基團。
2.如權利要求1所述的用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合，其特征在于，所述探針為：5'-FAM-CTTCTGACTACTCCCTCCGTCCTTCCTGC-Eclipse-3'。
3.如權利要求1或2所述的用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合在非診斷性檢測魚肉制品中藍圓鰺源成分中的應用。
4.一種用于藍圓鰺源成分檢測的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包含權利要求1或2所述的用于藍圓鰺源成分檢測的引物和探針組合。
5.如權利要求4所述的用于藍圓鰺源成分檢測的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括PerfectStart II Probe qPCR SuperMix和ddH2O。
6.利用權利要求5所述的試劑盒檢測魚肉制品中藍圓鰺源成分的方法，其特征在于：具體操作為：提取待測物的基因組DNA為模板，用所述試劑盒進行real-time PCR擴增，擴增完成后收集熒光信號。
7.如權利要求6所述的檢測魚肉制品中藍圓鰺源成分的方法，其特征在于：所述real-time PCR擴增的反應體系包括以下試劑及用量：2×PerfectStart II Probe qPCRSuperMix 12.5μL，上游引物和下游引物各1μL~2μL，探針1μL~2μL，DNA模板1μL，ddH2O補足至25μL；其中，所述上游引物和下游引物的濃度均為320nmol/L，所述探針的濃度為320nmol/L。
8.如權利要求6所述的檢測魚肉制品中藍圓鰺源成分的方法，其特征在于：所述real-time PCR擴增的條件為：95℃ 30 s；95℃ 5 s；60 ℃ 35 s；40個循環。
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