[發(fā)明專利]一種基于LAMP和自身猝滅熒光探針檢測鰹魚的引物組、方法和試劑盒

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202110776557.4
• 申請日: 2021-07-09
• 公開（公告）號: CN113355435A
• 公開（公告）日: 2021-09-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 熊雄;許文杰;崔曉文;操敏;熊曉輝
• 申請（專利權(quán)）人: 南京工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務(wù)所 32237
• 代理人: 仲凌霞;肖明芳

1.一種檢測鰹魚的引物組，其特征在于，包括一對外引物組，一對內(nèi)引物組和一對環(huán)引物組；所述外引物組為F3和B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述內(nèi)引物組為FIP和BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；所述環(huán)引物組為LF和LB，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示。

2.一種利用權(quán)利要求1所述引物組檢測鰹魚的方法。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述方法，其特征在于，以待檢測樣品的基因為DNA模板，利用權(quán)利要求1所述引物組進行環(huán)介導(dǎo)等溫擴增反應(yīng)，檢測鰹魚。

4.一種檢測鰹魚的試劑盒，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的引物組。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒，其特征在于，所述引物組中，引物F3、引物B3、引物FIP、引物BIP、引物L(fēng)F和引物L(fēng)B的濃度為5-15μM。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒，其特征在于，還包括陽性標準品。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒，其特征在于，還包括DNA提取試劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述試劑盒，其特征在于，還包括環(huán)介導(dǎo)等溫擴增反應(yīng)試劑。

9.根據(jù)權(quán)利要求3所述方法或權(quán)利要求8所述試劑盒，其特征在于，所述擴增反應(yīng)的反應(yīng)體系和擴增反應(yīng)試劑均為25μL的體系：2×Lamp Master Mix 12.5μL、10μM的引物F3 0.5μL、10μM的引物B3 0.5μL、10μM的引物FIP 2μL、10μM的引物BIP 2μL、10μM的引物L(fēng)F 1μL、10μM的引物L(fēng)B 1μL、50ng模板DNA，剩下的為水。

10.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述方法或權(quán)利要5-8中任意一項所述試劑盒，其特征在于，擴增反應(yīng)的產(chǎn)物在日光和/或紫外下進行可視化檢測；其中，在日光下進行可視化檢測時，如果產(chǎn)物呈黃色，則判定樣品中含有鰹魚，即為陽性；在紫外下進行可視化檢測時，如果產(chǎn)物呈現(xiàn)熒光色時，則判定樣品中含有鰹魚，即為陽性。