[發(fā)明專利]一種NLRP3啟動子甲基化的檢測引物組合物、應(yīng)用及檢測方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110773953.1
• 申請日: 2021-07-08
• 公開（公告）號: CN113416783A
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄧務(wù)國;龍謙;李振江
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南靈康醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 長沙楚為知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 43217
• 代理人: 李大為

1.一種NLRP3啟動子甲基化的檢測引物組合物，其特征在于，所述引物組合物包括上游引物cg21919599-F、下游引物cg21919599-Rbio和測序引物cg21919599-S，所述cg21919599-F的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述cg21919599-Rbio的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述cg21919599-S的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種NLRP3啟動子甲基化的檢測引物組合物，其特征在于，所述NLRP3啟動子甲基化位點為cg21919599，所述cg21919599位于基因啟動子轉(zhuǎn)錄起始位點上游2789bp處。

3.權(quán)利要求1所述的NLRP3啟動子甲基化的檢測引物組合物在制備NLRP3啟動子甲基化檢測工具中的應(yīng)用。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測工具包括但不限于作為單獨檢測試劑、檢測試劑盒。

5.權(quán)利要求1所述的NLRP3啟動子甲基化的檢測引物組合物在制備腎癌檢測工具中的應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求3-5任一所述的應(yīng)用，其特征在于，所述NLRP3啟動子甲基化位點為cg21919599，所述cg21919599位于基因啟動子轉(zhuǎn)錄起始位點上游2789bp處。

7.一種NLRP3啟動子甲基化的檢測工具，其特征在于，所述工具包括權(quán)利要求1所述的引物組合物。

8.利用權(quán)利要求1所示的引物組合物的檢測NLRP3啟動子甲基化的方法，其特征在于，包括以下步驟；

S1、待測樣本DNA的提取；

S2、對步驟S1提取的樣本DNA進行轉(zhuǎn)化和純化處理；

S3、利用上游引物上游引物cg21919599-F和下游引物cg21919599-Rbio對步驟S2得到的DNA進行PCR擴增；

S4、利用測序引物cg21919599-S對步驟S3得到的擴增后的PCR產(chǎn)物進行焦磷酸測序。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測NLRP3啟動子甲基化的方法，其特征在于，步驟S2中樣本DNA的濃度大于50ng/μL，樣本的總量大于500ng。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測NLRP3啟動子甲基化的方法，其特征在于，步驟S3中擴增的反應(yīng)體系如下：

加水至25μL，反應(yīng)程序為98℃10s，55℃30s，72℃30s，40個循環(huán)；72℃，1min；4℃，保持。