[發明專利]一種獲得大腸桿菌超級感受態細胞的制備方法

在審

• 申請號: 202110773406.3
• 申請日: 2021-07-08
• 公開（公告）號: CN113481229A
• 公開（公告）日: 2021-10-08
• 發明（設計）人: 曲紅金;呂妍;萬兵兵;曹禺;汪子喻;覃佐菊;李俊實
• 申請（專利權）人: 上海佐潤生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N1/20;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 上海和華啟核知識產權代理有限公司 31339
• 代理人: 達曉玲

1.一種獲得大腸桿菌超級感受態細胞的制備方法，其特征在于，包括步驟為：

步驟1：接種受體菌，在LB固體培養基上劃線，獲取單克?。?/p>

步驟2：將單克隆至培養基中，搖床上振蕩培養；

步驟3：當振蕩培養渾濁后，測定溶液的OD₆₀₀值；

步驟4：對溶液冷卻、離心，收集第一沉淀；

步驟5：采用緩沖液將所述第一沉淀重懸得到重懸液，并冷卻；

步驟6：再對重懸液離心，收集第二沉淀；

步驟7：采用緩沖液將所述第二沉淀重懸；

步驟8：滴加二甲基亞砜，冷卻，得到感受態細胞；

步驟9：將所述感受態細胞冷凍保存。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2中所述振蕩培養的溫度為20-25℃，時間為20-48小時。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2中所述培養基為包括細菌培養用胰化蛋白胨和酵母混合而成的培養基，所述細菌培養用胰化蛋白胨的濃度為3-5％w/v，所述酵母的濃度為0.4-0.7％w/v。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2中所述培養基的制備過程為將胰化蛋白胨、酵母、氯化鈉和氯化鉀混合，加壓蒸汽滅菌，再加入氯化鎂和硫酸鎂制得培養基。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟3中，當溶液的OD₆₀₀值為0.5-0.7時，將溶液取出冷卻。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4中所述離心是在轉速為2300-2600g下，溶液離心8-11分鐘。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟5中所述緩沖液為包括哌嗪-1,4-二乙磺酸、氯化鈣、氯化鉀和氯化錳的水溶液，所述緩沖液的pH值為6.4-6.7，所述哌嗪-1,4-二乙磺酸的濃度為7-15mM，所述氯化鈣的濃度為25-33mM，所述氯化鉀的濃度為210-300mM，所述氯化錳的濃度為50-60mM。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟6中所述離心是在轉速為2300-2600g下，重懸液離心7-9分鐘。

9.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟8中滴加至所述二甲基亞砜的體積濃度為5-9％。

10.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟9中所述冷凍是在液氮中冷凍的，所述保存是在-80℃下長期保存。