[發明專利]一種基于特征性肽段標簽鑒別植物蛋白肉樣品摻假情況的方法

有效

• 申請號: 202110765714.1
• 申請日: 2021-07-07
• 公開（公告）號: CN113429474B
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 邢竹青;高昂;張亞婷;謝赫然;徐芳;楊蓉蓉
• 申請（專利權）人: 天津中醫藥大學
• 主分類號: C07K14/77
• 分類號: C07K14/77;C07K14/415;C07K14/47;C12N9/04;C12N9/26;G01N33/68;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 趙穎

本發明提供了一種基于特征性肽段標簽鑒別植物蛋白肉樣品摻假情況的方法。所述特征性肽段標簽包括植物蛋白肉的特征性肽段和動物源性標準肉樣的特征性肽段；所述植物蛋白肉的特征性肽段包括SEQ ID NO.1和/或SEQ IDNO.2所示的氨基酸序列。所述方法采用兩步酶解法，結合高效液相色譜?串聯質譜方法和特征性肽段標簽，能夠定性和定量地檢測出植物蛋白肉制品中其他動物肉類的摻雜情況，同時，所述方法的樣品需求量小，檢測過程試劑耗材等耗損較少，適合用于大樣本量的檢測工作，因此本發明提供的方法為植物蛋白肉制品這一新型食品的質量安全監管提供了檢測技術支持。

技術領域

本發明屬于食品安全檢測技術領域，具體涉及一種基于特征性肽段標簽鑒別植物蛋白肉樣品摻假情況的定量檢測方法，尤其涉及一種基于高效液相色譜質譜聯用的測定植物蛋白肉樣品中不同物種來源及含量的方法。

背景技術

近年來全球肉類產能大幅度減少，傳統畜牧業將無法滿足產能需求，由大豆分離蛋白作為主要原料加入其它植物性成分制作而成的新型食品——植物蛋白肉恰好為此提供了一個綠色環保的解決辦法，形成了一股新的飲食變革熱潮。但隨著對這一新型食品關注度不斷提高，其中是否有動物肉摻假的情況已成為素食主義者最關心的安全性問題之一。

當下，對于動物源成分檢測方法的研究熱點集中在對于肉類基質中摻入其他肉類進行儀器快速識別種類和簡單定量，鮮有對于植物基產品中肉類摻入檢測方法建立的描述，更未有針對植物蛋白肉這類產品進行動物肉摻假方面的研究報道。現有報道中針對傳統素食中動物源成分檢測的主要方法為檢測DNA的PCR法和檢測蛋白質的ELISA法，但是二者的實施效果均存在不足。

對于PCR法來說，模板的質量與引物的特異性很大程度決定了實驗的準確度。不論植物蛋白肉產品還是傳統的素食產品都經過一系列食品加工過程，在此期間DNA結構遭到較大的破壞，這無疑會影響后續提取DNA模板的質量，甚至造成結果呈現假陰性。同時，引物的設計選擇也很重要，對于摻假定量的可靠性很難控制。

對于ELISA法來說，抗體的特異性及食品基質中其他蛋白的干擾作用也可能會較大程度的影響定量效果，造成結果的偏差。

隨著檢測技術的不斷發展進步，液相色譜-質譜法逐漸成為物種鑒定的新方式，可通過特異性的肽段識別，進行重現度好、靈敏度高的定量檢測，尤其是對于食品深加工產品也可以表現出良好的檢測效果，展現了PCR法和ELISA法所不具備的優勢。雖然已有報道利用液相色譜串聯質譜法進行肉類產品摻假檢測，但由于植物基食物與動物基食物自身蛋白性質的結構差異和豆科食品中對于胰蛋白酶的抑制因子，使常規檢測流程并不適用于植物基食品中產品摻假檢測。

因此，提供一種結果準確、可靠性高的檢測植物蛋白肉制品是否摻假的方法對于本領域而言具有重要的意義。

發明內容

針對現有技術存在的不足，本發明的目的在于提供一種基于特征性肽段標簽鑒別植物蛋白肉樣品摻假情況的方法。該方法結合液相色譜-串聯質譜方法和特征性肽段標簽，適用于植物蛋白肉原料、半成品、成品和熟制品中動物肉摻假的定性和定量檢測，為該類植物蛋白肉產品的質量保證提供分析技術手段。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供一種用于檢測植物蛋白肉樣品的特征性肽段標簽，所述特征性肽段標簽包括植物蛋白肉的特征性肽段和動物源性標準肉樣的特征性肽段；

所述植物蛋白肉的特征性肽段包括SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

本發明中，分別將標準肉樣(如雞肉、牛肉、豬肉等)和植物蛋白肉樣品所得肽段進行同類中的并集分析，再從同類動物肉標準樣品共有的肽段中找到區別于植物蛋白肉樣品的肽段和其他種類動物樣品肽段，最終分別得到植物蛋白肉獨有肽段5條，雞肉獨有肽段5條，豬肉獨有肽段107條，牛肉獨有肽段122條。