[發明專利]一種基于特征性肽段標簽鑒別植物蛋白肉樣品摻假情況的方法

有效

• 申請號: 202110765714.1
• 申請日: 2021-07-07
• 公開（公告）號: CN113429474B
• 公開（公告）日: 2022-08-05
• 發明（設計）人: 邢竹青;高昂;張亞婷;謝赫然;徐芳;楊蓉蓉
• 申請（專利權）人: 天津中醫藥大學
• 主分類號: C07K14/77
• 分類號: C07K14/77;C07K14/415;C07K14/47;C12N9/04;C12N9/26;G01N33/68;G01N30/02;G01N30/06;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 趙穎

1.用于檢測植物蛋白肉樣品的特征性肽段標簽，其特征在于，所述特征性肽段標簽包括植物蛋白肉的特征性肽段和動物源性標準肉樣的特征性肽段；

所述植物蛋白肉的特征性肽段為SEQ ID NO.1和/或SEQ ID NO.2所示的肽。

2.根據權利要求1所述的特征性肽段標簽，其特征在于，所述動物源性標準肉樣的來源包括雞、牛或豬中的任意一種或至少兩種的組合；

所述動物源性標準肉樣的特征性肽段為SEQ ID NO.3~11中任意一項或至少兩項所示的肽。

3.一種利用如權利要求1或2所述的特征性肽段標簽鑒別植物蛋白肉樣品摻假情況的方法，其特征在于，所述方法包括：

前處理：使用胃蛋白酶和胰蛋白酶酶解所述植物蛋白肉樣品，而后，去除所述酶解后產物中的大于10 kDa的大分子物質，除鹽；

上機檢測：采用高效液相色譜-質譜聯用方法對所述前處理后得到的樣品進行檢測，對檢測結果進行注釋，再將所得多肽的序列信息與權利要求1或2所述的特征性肽段標簽進行比對，得到所述植物蛋白肉樣品的摻假情況。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述前處理的具體步驟包括：

將所述植物蛋白肉樣品與第一溶液混合，而后離心取上清，再將所述上清與胃蛋白酶混合，調節pH后，進行第一次酶解；

所述第一次酶解結束后，所得第一次酶解產物與第二溶液以及胰蛋白酶混合，調節pH后，進行第二次酶解，得到第二次酶解產物；

所述胃蛋白酶的工作濃度為1500~3000 U/mL；

所述胰蛋白酶的工作濃度為0.5~0.8 mg/mL；

所述前處理的步驟中還包括使用BCA試劑盒測定胃蛋白酶或胰蛋白酶消化后蛋白濃度的操作。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一溶液包括：5~8 mM KCl、0.8~1.0mM KH₂PO₄、20~30 mM NaHCO₃、40~50 mM NaCl、0.05~0.1 mM MgCl₂·6H₂O和0.5~1 mM(NH₄)₂CO₃；

所述第二溶液包括5~8 mM KCl、0.8~1.0 mM KH₂PO₄、70~100 mM NaHCO₃、30~50 mMNaCl和0.2~0.4 mM MgCl₂·6H₂O；

所述上清與胃蛋白酶混合后將混合溶液的pH調節至2.0~3.5；

所述第一次酶解產物與胰蛋白酶混合后將混合溶液的pH調節至6.5~7.5。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述大分子物質的去除方法包括采用超濾管進行超濾；

所述除鹽的方法包括將去除大分子物質后所得溶液加入除鹽柱中，再加入洗脫液進行洗脫；

所述洗脫液包括質量分數為0.1~0.5%的TFA和質量分數為70~85%的乙腈。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述上機檢測的步驟中高效液相色譜使用的色譜柱為C18色譜柱；

所述高效液相色譜中使用的A液為質量分數為0.05~0.1%的甲酸水溶液，B液為質量分數為0.05~0.1%的甲酸-乙腈溶液；

所述質譜采用數據依賴模式在MS和MS/MS間切換采集；

所述質譜的一級掃描范圍為m/z 350~1600；

所述質譜過程中母離子質荷比最低掃描范圍固定為m/z 110，最高掃描范圍固定為m/z2000；

所述MS/MS的最低離子強度值設定為50000，離子最大引入時間為100 ms，自動增益控制設定為1.0×10⁵，母離子選擇窗口設定為1.8道爾頓。