[發明專利]一種祁術下胚軸直接再生與體外生根的方法

有效

• 申請號: 202110765180.2
• 申請日: 2021-07-06
• 公開（公告）號: CN113475395B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發明（設計）人: 侯金艷;吳麗芳;王萍;王軍
• 申請（專利權）人: 中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G22/00;A01G24/10;A01G24/15
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙) 34124
• 代理人: 繆璐歡

本發明公開一種祁術下胚軸直接再生與體外生根的方法，涉及植物生物技術領域，本發明包括以下步驟：(1)外植體的預處理；(2)不定芽的誘導與繼代增殖培養；(3)不定芽的伸長培養；(4)伸長芽的體外生根處理；(5)伸長芽的定植與成苗培養。本發明的有益效果在于：本發明所涉及的繁育過程具有再生效率高，操作簡單，成苗時間短，成苗率高等優勢，為后期祁術種苗的規模化繁育和品種改良奠定了基礎。

技術領域

本發明涉及植物生物技術領域，具體涉及一種祁術下胚軸直接再生與體外生根的方法。

背景技術

祁術即祁門白術，為菊科蒼術屬多年生草本植物，是徽州名優特產“三祁”(祁術、祁紅茶、祁蛇)之一，是安徽道地名貴藥材，具有重要的藥用價值，是多種中成藥的原料藥。具有益胃、利濕、止瀉、養神、安胎、消除疲勞和虛脫等多種功能，對黃膽病、心臟病、胃潰瘍及腹水病人的康復十分有效，俗有“北參南術”、“十方九術”之說。作為道地藥材的祁術，其品質及療效均優于其他地域的同種藥材，這與其獨特的品種以及得天獨厚的生長環境有著密切的聯系。現代藥理學研究表明，祁術主要含有蒼術酮、術內酯、倍半萜類化合物、杜松酯和棕櫚酸等成分，具有較強的生物活性，在利尿、抗腫瘤、抗菌消炎、抗糖尿病、抗衰老等方面具有重要的作用，此外，祁術還具有調節人體免疫功能。近年來，隨著人們生活素養的提高及對養生的重視，對道地祁術的需求日益增加。然而，由于野生祁術的采挖過度及生境的人為破壞，野生祁術已處于瀕危滅絕境地。

目前，在生產上，祁術主要采用播種繁殖，但由于祁術種子產量低，萌發率低，苗期抵抗力弱等問題，致使祁術成苗率非常低。為了保證祁術產業的健康可持續發展，亟需研發一種高效的祁術育苗技術，在提高祁術繁育系數的同時提高祁術田間成苗率，以滿足市場對祁術種苗的需求。

植物組織培養技術作為一種新的高效育苗技術，因其具有繁育周期短，繁殖系數高，所需要的外植體材料少等優勢，在瀕危植物的繁育中起著重要作用。目前，有關利用組織培養技術對祁術進行繁殖的相關研究已有零星報道，如論文(胡長玉,葉玉娟,郝祥霞,等.祁術的組織培養及快速繁殖技術研究[J].黃山學院學報,2006(05):57-60.)中公開選用祁術的葉片和下胚軸接種于附加植物生長調節劑NAA、6-BA及其組合的MS固體培養基上，進行誘導分化。該技術與傳統祁術育苗技術相比，雖能加快祁術的人工繁殖速度，但從現有的研究結果來看，其增殖系數較低且煉苗過程中同樣存在成苗率較低問題。為了滿足規模化種植和品種改良對祁術種苗的需求，急需開發一種祁術下胚軸直接高效再生與體外生根的方法。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于一種祁術下胚軸直接再生與體外生根的方法。

本發明通過以下技術手段實現解決上述技術問題：

一種祁術下胚軸直接再生與體外生根的方法，包括以下步驟：

(1)外植體的預處理：以祁術萌發種子實生苗的下胚軸為外植體，于超聲儀中進行預處理后，切成適宜大小的切段，吸干表面水分，備用；

(2)不定芽的誘導與繼代增殖培養：將步驟(1)中預處理的下胚軸切段接種于不定芽誘導培養基中，于溫室中進行不定芽的誘導光照培養；光照培養后轉接于繼代增殖培養基中進行繼代增殖培養；

(3)不定芽的伸長培養：繼代培養后，將步驟(2)中的不定芽從不定芽叢上分離后直接轉接于伸長培養基中于溫室中進行芽的光照伸長培養；

(4)伸長芽的體外生根處理：將步驟(3)中伸長的組培芽取出，然后將伸長芽基部置于含有500-2000mg/L 3-吲哚丁酸鉀和500-1000μM褪黑素的生根促進液中進行不定根的誘導處理；

(5)伸長芽的定植與成苗培養：將步驟(4)中處理后的伸長芽基部定植于裝有營養基質的塑料育苗盤中，蓋上育苗蓋，于溫室中進行不定根的誘導與成苗培養。