[發(fā)明專利]一種祁術(shù)下胚軸直接再生與體外生根的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110765180.2
• 申請(qǐng)日: 2021-07-06
• 公開（公告）號(hào): CN113475395B
• 公開（公告）日: 2022-05-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 侯金艷;吳麗芳;王萍;王軍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;A01G22/00;A01G24/10;A01G24/15
• 代理公司: 合肥市浩智運(yùn)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 34124
• 代理人: 繆璐歡

1.一種祁術(shù)下胚軸直接再生與體外生根的方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)外植體的預(yù)處理：以祁術(shù)萌發(fā)種子實(shí)生苗的下胚軸為外植體，于超聲儀中進(jìn)行預(yù)處理后，切成適宜大小的切段，吸干表面水分，備用；預(yù)處理步驟為將下胚軸置于裝有無菌水的離心管中于超聲儀中于600W超聲處理30-120s，然后于無菌操作臺(tái)中切成0.3cm的切段，備用；

(2)不定芽的誘導(dǎo)與繼代增殖培養(yǎng)：將步驟(1)中預(yù)處理的下胚軸切段接種于不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于溫室中進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)光照培養(yǎng)；光照培養(yǎng)后轉(zhuǎn)接于繼代增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)；所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基和繼代增殖培養(yǎng)基均為：DKW+5.0mg/L KT+0.1mg/L IAA+5mg/L VC+3.0％w/v蔗糖+0.7％w/v瓊脂，pH＝5.8；

(3)不定芽的伸長培養(yǎng)：繼代培養(yǎng)后，將步驟(2)中的不定芽從不定芽叢上分離后直接轉(zhuǎn)接于伸長培養(yǎng)基中于溫室中進(jìn)行芽的光照伸長培養(yǎng)；所述不定芽的伸長培養(yǎng)基為：1/2DKW+0.5mg/L ZT+2.5mg/L VC+3.0％w/v蔗糖+0.7％w/v瓊脂，pH＝5.8；

(4)伸長芽的體外生根處理：將步驟(3)中伸長的組培芽取出，然后將伸長芽基部置于含有500-2000mg/L 3-吲哚丁酸鉀和500-1000μM褪黑素的生根促進(jìn)液中進(jìn)行不定根的誘導(dǎo)處理10s；

(5)伸長芽的定植與成苗管理：將步驟(4)中處理后的伸長芽基部定植于裝有營養(yǎng)基質(zhì)的塑料育苗盤中，蓋上育苗蓋，于溫室中進(jìn)行不定根的誘導(dǎo)與成苗培養(yǎng)；成苗培養(yǎng)期間每隔2周，葉片噴施一次營養(yǎng)補(bǔ)液；

所述步驟(3)中所述的伸長培養(yǎng)的溫室條件為溫度為23±2℃，LED光質(zhì)及配比為紅藍(lán)復(fù)合光3：1，光照強(qiáng)度為50μmol·m^-2·s^-1，光照時(shí)間為16h，相對(duì)濕度為50-60％。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的祁術(shù)下胚軸直接再生與體外生根的方法，其特征在于：所述步驟(4)中切除基部0.2cm左右莖段后將伸長芽置于自來水中清洗3遍，然后將伸長芽基部置于含有2000mg/L 3-吲哚丁酸鉀和1000μM褪黑素的生根促進(jìn)液中進(jìn)行不定根的誘導(dǎo)處理。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的祁術(shù)下胚軸直接再生與體外生根的方法，其特征在于：所述步驟(5)中的營養(yǎng)基質(zhì)為品氏泥炭土：園土：蛭石：珍珠巖＝3:2:1:1；所述營養(yǎng)基質(zhì)經(jīng)過營養(yǎng)補(bǔ)液噴施處理，所述的營養(yǎng)補(bǔ)液為添加有100μM褪黑素的不含有機(jī)元素的1/8DKW基本培養(yǎng)液。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的祁術(shù)下胚軸直接再生與體外生根的方法，其特征在于：所述上述步驟(2)和(5)中所述的溫室條件為溫度為23±2℃，光源為LED白光，光照強(qiáng)度為50μmol·m^-2·s^-1，光照時(shí)間為16h，相對(duì)濕度為50-60％。