[發明專利]一種檢測CAR-T細胞scFv親和力的方法

有效

• 申請號: 202110764864.0
• 申請日: 2021-07-07
• 公開（公告）號: CN113252894B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 何霆;齊菲菲;魯薪安;劉光華;胡雪蓮;許文平
• 申請（專利權）人: 北京藝妙神州醫藥科技有限公司;山東金賽生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 張擁;張廣育

本發明涉及一種檢測CAR?T細胞scFv親和力的方法，將CAR?T細胞與靶抗原⁺細胞混合后共同孵育，流式法檢測CAR?T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力。本發明采用流式法直接檢測CAR?T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力，準確地反映了CAR?T細胞對靶抗原⁺細胞的識別效應。

技術領域

本發明涉及細胞治療技術領域，尤其涉及一種檢測CAR-T細胞scFv親和力的方法。

背景技術

目前，檢測目標蛋白（例如CAR-T細胞scFv）對相應靶抗原親和力的方法主要有SPR（surface plasmon resonance，表面等離子體共振）技術，主要操作過程為：首先將待測抗體所識別的抗原偶聯在傳感芯片表面，然后注入待測抗體，通過芯片表面直接監測抗體-抗原結合過程，利用分析軟件提供反應動力學常數及親和力等數據。現有專利（申請公布號：CN111351936A）公開了一種CD19-CAR親和力檢測方法，具體為：首先構建一種高表達CD19的穩定細胞株，然后檢測不同濃度的CD19抗體（該抗體來源于CD19 CAR-T中scFv序列）分別與CD19陽性細胞的親和力，同時檢測不同濃度的CD19蛋白與CD19 CAR-T細胞的親和力。

而目前檢測CAR-T細胞scFv親和力的方法脫離了CAR-T細胞而直接檢測scFv蛋白對目標靶抗原的結合能力，即將scFv蛋白從CAR-T細胞分離純化出來，然后檢測scFv蛋白對目標靶抗原的親和力，卻忽略了CAR-T細胞與靶抗原細胞（例如腫瘤細胞）結合時所產生的空間位阻效應，無法真實反映CAR-T細胞對靶抗原細胞的親和力，進而無法準確檢測出CAR-T細胞對相應靶抗原⁺細胞的親和力，影響后續CAR-T細胞產品研發的進度。亟需一種能夠準確檢測CAR-T細胞scFv親和力的方法。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的是提出一種檢測CAR-T細胞scFv親和力的方法，本發明采用流式法直接檢測CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力，準確地反映了CAR-T細胞對靶抗原⁺細胞的識別效應。

基于上述目的，本發明的第一個方面提供了一種檢測CAR-T細胞scFv親和力的方法，將CAR-T細胞與靶抗原⁺細胞混合后共同孵育，流式法檢測CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力。

在本發明的優選的實施方案中，根據流式法檢測到的CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的結合呈現形式來判斷CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力大小。

在本發明的優選的實施方案中，判斷CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力大小的方法為：

(1) 若流式細胞檢測中呈現為CD3^-靶抗原^-細胞和CD3⁺靶抗原^-細胞，則判斷CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞具有很強的親和力；

(2) 若流式細胞檢測中呈現為CD3^-靶抗原⁺細胞、CD3⁺靶抗原⁺細胞和CD3⁺靶抗原^-細胞，則判斷CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞具有相對較強的親和力；

(3) 若流式細胞檢測中呈現為CD3⁺靶抗原^-細胞和CD3^-靶抗原⁺細胞，則判斷CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力較弱或無特異性親和力。