[發明專利]一種檢測CAR-T細胞scFv親和力的方法

有效

• 申請號: 202110764864.0
• 申請日: 2021-07-07
• 公開（公告）號: CN113252894B
• 公開（公告）日: 2021-11-09
• 發明（設計）人: 何霆;齊菲菲;魯薪安;劉光華;胡雪蓮;許文平
• 申請（專利權）人: 北京藝妙神州醫藥科技有限公司;山東金賽生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/68
• 代理公司: 北京北翔知識產權代理有限公司 11285
• 代理人: 張擁;張廣育

1.一種檢測CAR-T細胞scFv親和力的方法，其中，將CAR-T細胞與靶抗原⁺細胞混合后共同孵育，流式法檢測CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力；根據流式法檢測到的CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的結合呈現形式來判斷CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力大?。?/p>

判斷CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力大小的方法為：

(1) 若流式細胞檢測中呈現為CD3^-靶抗原^-細胞和CD3⁺靶抗原^-細胞，則判斷CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞具有很強的親和力；

(2) 若流式細胞檢測中呈現為CD3^-靶抗原⁺細胞、CD3⁺靶抗原⁺細胞和CD3⁺靶抗原^-細胞，則判斷CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞具有相對較強的親和力；

(3) 若流式細胞檢測中呈現為CD3⁺靶抗原^-細胞和CD3^-靶抗原⁺細胞，則判斷CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力較弱或無特異性親和力；

CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的結合呈現上述三種不同等級，其親和力大小為（1）＞（2）＞（3）；

其中，“靶抗原⁺細胞”是指在其細胞表面表達靶抗原的細胞；

“CD3⁺靶抗原^-細胞”是指這樣的T細胞或CAR-T細胞，該細胞的膜表面有CD3分子，但其細胞表面不表達靶抗原；或者，是指這樣的CAR-T細胞，其識別靶抗原后，將靶抗原吸收并進行內化進入了細胞內；

“CD3^-靶抗原⁺細胞”是指這樣的靶細胞，該細胞表面表達靶抗原或部分靶抗原被CAR-T細胞識別并奪取，但該細胞的膜表面無CD3分子；

“CD3⁺靶抗原⁺細胞”是指這樣的CAR-T細胞，該細胞的膜表面有CD3分子，且該細胞與靶細胞表面的部分靶抗原結合后形成復合體或成功奪取靶抗原但還未進行內化；

“CD3^-靶抗原^-細胞”是指這樣的靶細胞，該細胞表面的全部靶抗原被CAR-T細胞識別并奪取，且該細胞的膜表面無CD3分子。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，若流式法檢測到的CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的結合呈現形式為第(1)種情況，CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力的計算如下：

；

其中n=CAR-T細胞與靶抗原⁺細胞混合后共同孵育的時間，第0小時靶抗原⁺細胞的比例和第n小時靶抗原⁺細胞的比例均是通過流式法檢測得到。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，若流式法檢測到的CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的結合呈現形式為第(2)種情況，CAR-T細胞scFv與靶抗原⁺細胞的親和力的計算如下：

；

其中n=CAR-T細胞與靶抗原⁺細胞混合后共同孵育的時間，第n小時CD3⁺靶抗原⁺細胞的比例和第0小時CD3⁺靶抗原⁺細胞的比例均是通過流式法檢測得到。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述CAR-T細胞與靶抗原⁺細胞混合后，在35~38℃和3~8%CO₂中共同孵育。