[發(fā)明專(zhuān)利]一種降低畢赤酵母表達(dá)外源蛋白氧化修飾的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110764779.4
• 申請(qǐng)日: 2021-07-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN115595348A
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-01-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁滿(mǎn)生;范敏;趙江彪;胡亮;郝龍;代虎;沈紅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 江蘇泰康生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12P21/00
• 分類(lèi)號(hào): C12P21/00;C12N1/38;C12N1/16;C12R1/84
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種降低畢赤酵母表達(dá)外源蛋白氧化修飾的方法，其特征在于以甲醇作為誘導(dǎo)劑和碳源的誘導(dǎo)表達(dá)階段，混合補(bǔ)加山梨醇將畢赤酵母甲醇代謝中的甲醛異化途徑轉(zhuǎn)移至TCA途徑；

其中，甲醇誘導(dǎo)階段的菌體濃度OD600為225-275，以0.6-1.2mL/h/L初始發(fā)酵體積的速率流加山梨醇。

2.如權(quán)利要求1所述降低畢赤酵母表達(dá)外源蛋白氧化修飾的方法，其特征在于所述甘油培養(yǎng)階段的操作如下：控制溫度30±1℃、pH5.0±0.2，根據(jù)實(shí)際情況調(diào)節(jié)攪拌轉(zhuǎn)速和空氣流量，必要時(shí)通入純氧控制溶氧在10％以上，經(jīng)過(guò)約10-18h培養(yǎng)，培養(yǎng)基中甘油耗完，出現(xiàn)溶氧峰后，按11.1mL/h/L-19.4mL/h/L初始發(fā)酵體積補(bǔ)入甘油補(bǔ)料，OD達(dá)225-275，停止流加，進(jìn)入誘導(dǎo)階段。

3.如權(quán)利要求1所述降低畢赤酵母表達(dá)外源蛋白氧化修飾的方法，其特征在于所述誘導(dǎo)表達(dá)階段按以下方案流加甲醇：

誘導(dǎo)0-5h，2.96-3.71mL/h/L初始發(fā)酵體積，

誘導(dǎo)5-10h，4.78-5.71mL/h/L初始發(fā)酵體積，

誘導(dǎo)10-16h，6.22-7.76mL/h/L初始發(fā)酵體積，

誘導(dǎo)16-36h，7.81-9.3mL/h/L初始發(fā)酵體積，

誘導(dǎo)36h-放罐，9.71-12.3mL/h/L初始發(fā)酵體積。

4.如權(quán)利要求1所述降低畢赤酵母表達(dá)外源蛋白氧化修飾的方法，其特征在于所述誘導(dǎo)表達(dá)階段還包括甲醇適應(yīng)后一次性補(bǔ)加PTM1微量元素，同時(shí)以4.11-4.37mL/h/L初始發(fā)酵體積恒速流加YP補(bǔ)料氮源；誘導(dǎo)48h再次一次性補(bǔ)加PTM1微量元素。

5.如權(quán)利要求1所述降低畢赤酵母表達(dá)外源蛋白氧化修飾的方法，其特征在于所述誘導(dǎo)表達(dá)階段控制溫度為25±1℃、pH值為5.3-6.0、溶氧≥10％。

6.一種山梨醇在降低畢赤酵母表達(dá)外源蛋白氧化修飾中的用途，其特征在于所述山梨醇通過(guò)與甲醇混補(bǔ)將畢赤酵母甲醇代謝中的甲醛異化途徑轉(zhuǎn)移至TCA途徑，所述山梨醇在甲醇誘導(dǎo)開(kāi)始16h后，以0.6-1.2mL/h/L初始發(fā)酵體積的速率流加山梨醇。

7.如權(quán)利要求6所述山梨醇在降低畢赤酵母表達(dá)外源蛋白氧化修飾中的用途，其特征在于按以下方案流加甲醇：

誘導(dǎo)0-5h，2.96-3.71mL/h/L初始發(fā)酵體積，

誘導(dǎo)5-10h，4.78-5.71mL/h/L初始發(fā)酵體積，

誘導(dǎo)10-16h，6.22-7.76mL/h/L初始發(fā)酵體積，

誘導(dǎo)16-36h，7.81-9.3mL/h/L初始發(fā)酵體積，

誘導(dǎo)36h-放罐，9.71-12.3mL/h/L初始發(fā)酵體積。