[發明專利]一種串聯表達的口蹄疫病毒VLP亞單位疫苗

在審

• 申請號: 202110762463.1
• 申請日: 2021-07-06
• 公開（公告）號: CN113908266A
• 公開（公告）日: 2022-01-11
• 發明（設計）人: 陳平;鐘鑫濤;張婷婷;李娜;李楠
• 申請（專利權）人: 嘉興安宇生物科技有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61K39/135;A61P31/14;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/866
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧;曹小燕

1.一種口蹄疫病毒VLP疫苗，其特征在于，由融合片段A-O-VLP-3Cmutan在表達體系中表達形成，所述表達系統選自大腸桿菌、酵母、昆蟲細胞、植物或者哺乳動物細胞中的任一種。

2.如權利要求1所述的VLP疫苗，其特征在于，所述A-O-VLP-3Cmutant具有如序列表中Seq ID NO.3所示的核苷酸序列；A-O-VLP-3Cmutant氨基酸序列推導得到的氨基酸序列如序列表Seq ID NO.7所示；所述表達體系為SF9真核表達系統。

3.一種口蹄疫病毒VLP疫苗的制備方法，其特征在于，通過口蹄疫病毒A型的A-P12A基因和O型的O-P12A3C-mutant基因，制得融合片段A-O-VLP-3Cmutant，再經表達體系中表達形成。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，所述O-P12A3C-mutant基因是將O-P12A和O-3C-mutant進行融合PCR而獲得，其中的O-P12A和O-3C-mutant分別具有如序列表中Seq IDNO.4、Seq ID NO.5所示的核苷酸序列。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述的O-3C-mutant是由O-3C的第127個氨基酸由L變為P而獲得，其中的3C具有如序列表Seq ID NO.6所示的核苷酸序列。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述A-P12A、O-P12A3C-mutant、A-O-VLP-3Cmutant具有如序列表中Seq ID NO.1、Seq ID NO.2、Seq ID NO.3所示的核苷酸序列。

7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的A-O-VLP-3Cmutant經表達體系表達制備VLP，是通過pFast-A-O-VLP-3Cmutant轉入DH10bac感受態細胞，進行重組、篩選、鑒定，得到Bacmid-A-O-VLP-3Cmutant質粒，再轉入表達體系，所述表達系統選自大腸桿菌、酵母、昆蟲細胞、植物或者哺乳動物細胞中的任一種。其A型結構蛋白P1和O型結構蛋白P1以及3C蛋白酶中間均使用來自口蹄疫病毒的順式裂解元件2A蛋白酶進行分離，共用一個3C蛋白酶進行酶切形成VP4、VP3、VP2、VP1四種結構蛋白，并組裝成VLP。

8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述表達體系為SF9真核表達系統；A-O-VLP-3Cmutant經SF9真核表達系統表達的氨基酸序列如序列表中Seq ID NO.7所示。

9.如權利要求3～8任一項所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)制備口蹄疫病毒A型的A-P12A基因和O型的O-P12A3C-mutant基因；

2)pFast載體與A-P12A酶切連接獲得pFast-A-P12A；

3)pFast-A-P12A與O-P12A3C-mutant酶切連接獲得pFast-A-O-VLP-3Cmutant；

4)pFast-A-O-VLP-3Cmutant轉入DH10bac感受態細胞，得到Bacmid-A-O-VLP-3Cmutant質粒；

5)Bacmid-A-O-VLP-3Cmutant轉入SF9真核表達系統，收獲重組桿狀病毒。

10.如權利要求9所述的方法，其特征在于，收獲的重組桿狀病毒還需擴增，裂解，再經過分子篩過柱純化。