[發(fā)明專(zhuān)利]一種串聯(lián)表達(dá)的口蹄疫病毒VLP亞單位疫苗

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110762463.1
• 申請(qǐng)日: 2021-07-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113908266A
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳平;鐘鑫濤;張婷婷;李娜;李楠
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 嘉興安宇生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): A61K39/295
• 分類(lèi)號(hào): A61K39/295;A61K39/135;A61P31/14;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/866
• 代理公司: 杭州天昊專(zhuān)利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧;曹小燕

本發(fā)明提供一種串聯(lián)表達(dá)的口蹄疫病毒VLP亞單位疫苗，所述疫苗含有通過(guò)SF9真核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的串聯(lián)的口蹄疫病毒A型和O型病毒樣顆粒(VLP)。所述方案能表達(dá)A?O?VLP?3Cmutant，由于其串聯(lián)表達(dá)的特性，一次可以同時(shí)生產(chǎn)兩價(jià)疫苗，并且兩種抗原表達(dá)量保持一致；相對(duì)于表達(dá)口蹄疫病毒單一血清型VLP，串聯(lián)表達(dá)基于使用2A蛋白酶切位點(diǎn)鏈接并且共用一個(gè)3C蛋白酶的特性，減少了3C蛋白酶表達(dá)，這使串聯(lián)表達(dá)的總產(chǎn)量更高，大約提升30％左右；安全性高，有效避免了病毒泄漏或滅活不徹底等風(fēng)險(xiǎn)；應(yīng)用范圍較廣，只要得到結(jié)構(gòu)蛋白基因序列，就可以開(kāi)發(fā)相應(yīng)的VLP疫苗以及串聯(lián)表達(dá)多種血清型或流行株的疫苗；成本低，一次生產(chǎn)即可獲得雙價(jià)疫苗，同時(shí)本發(fā)明不需要高等級(jí)的生產(chǎn)設(shè)施，采用的SF9昆蟲(chóng)細(xì)胞生產(chǎn)成本也遠(yuǎn)低于哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

本申請(qǐng)主張中國(guó)在先申請(qǐng),申請(qǐng)?zhí)?202010665408.6，申請(qǐng)日2020年7月11日的優(yōu)先權(quán)；其所有的內(nèi)容作為本發(fā)明的一部分。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域和免疫學(xué)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種串聯(lián)表達(dá)的口蹄疫病毒VLP亞單位疫苗及其構(gòu)建方法。

背景技術(shù)

口蹄疫(Foot-and-mouth disease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdisease virus，F(xiàn)MDV)引起的動(dòng)物急性、烈性傳染病，主要危害豬、牛、羊等偶蹄動(dòng)物，發(fā)病率極高，能造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。

口蹄疫病毒有O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3(即南非1、2、3型)和Asia1(亞洲 1型)7個(gè)血清型。各型之間幾乎沒(méi)有免疫保護(hù)力，感染了一型口蹄疫的動(dòng)物仍可感染另一型口蹄疫病毒而發(fā)病。

口蹄疫病毒顆粒呈圓形，表面光滑，直徑約27～30nm。病毒粒子無(wú)囊膜，呈二十面體對(duì)稱(chēng)，F(xiàn)MDV的ORF編碼一個(gè)大的聚合蛋白，在病毒翻譯的同時(shí)，也伴隨著聚合蛋白的剪切、折疊等翻譯后的加工。

口蹄疫病毒包括結(jié)構(gòu)蛋白基因P1和非結(jié)構(gòu)蛋白基因P2、P3，其中P1基因編碼口蹄疫病毒的抗原結(jié)構(gòu)，是研究口蹄疫免疫機(jī)制和新型疫苗的基礎(chǔ)，長(zhǎng)約2200nt，能在2A和3C蛋白酶的作用下裂解產(chǎn)生4種基因，1A、1B、1C、1D，分別編碼VP4、VP3、VP2、VP1四種結(jié)構(gòu)蛋白，并組裝成病毒的衣殼，由蛋白衣殼包裹基因組RNA組成核衣殼。

病毒樣顆粒(VLP)具有與真實(shí)病毒粒子大小相似的結(jié)構(gòu)，能引起免疫應(yīng)答但不具有感染性，可模擬病毒真實(shí)空間結(jié)構(gòu)，又不需要冒險(xiǎn)培養(yǎng)真實(shí)病毒。VLP疫苗為利用微生物的表面結(jié)構(gòu)成分(抗原)來(lái)制成不含核酸、能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體的疫苗，又稱(chēng)VLP亞單位疫苗。

口蹄疫病毒是無(wú)囊膜的RNA病毒，其結(jié)構(gòu)蛋白可組裝成VLP，且具有良好的免疫原性，可以用于生產(chǎn)疫苗，也可用于檢測(cè)口蹄疫病毒中和抗體，因此制備口蹄疫病毒的VLP 亞單位疫苗具有很好的應(yīng)用前景。

目前國(guó)內(nèi)流行口蹄疫病毒血清型主要是A型和O型。因此進(jìn)行口蹄疫防疫工作時(shí)，需要免疫兩種血清型的疫苗。目前市面上口蹄疫病毒疫苗在A型和O型雙價(jià)苗選擇很有限，價(jià)格也較為昂貴，因?yàn)殡p價(jià)苗需要培養(yǎng)A型和O型兩種病毒，如采用一條生產(chǎn)線存在交叉污染風(fēng)險(xiǎn)，必須采用兩條高等級(jí)生物安全生產(chǎn)線分別進(jìn)行生產(chǎn)口蹄疫病毒A型和O型滅活疫苗，生產(chǎn)成本較高。還有一種選擇是分別免疫口蹄疫病毒A型和O型兩種疫苗，購(gòu)買(mǎi)兩種疫苗成本也不低，而且免疫程序更復(fù)雜，不利于降低養(yǎng)殖成本。

基于滅活工藝生產(chǎn)的口蹄疫病毒疫苗，需要特定的高等級(jí)生產(chǎn)設(shè)施，生產(chǎn)成本高，并且可能存在泄漏或滅活不徹底的散毒風(fēng)險(xiǎn)。再者對(duì)于還沒(méi)有規(guī)模培養(yǎng)工藝的口蹄疫病毒或者本地區(qū)未發(fā)現(xiàn)但已公布序列的毒株無(wú)法迅速開(kāi)發(fā)對(duì)應(yīng)的疫苗。因此口蹄疫病毒的VLP亞單位疫苗為目前制備口蹄疫病毒疫苗的最佳選擇，能模擬口蹄疫病毒真實(shí)空間結(jié)構(gòu)，又不需要冒險(xiǎn)培養(yǎng)口蹄疫病毒。

因此急需一種直接通過(guò)一條生產(chǎn)鏈即可完成的，能夠完整表達(dá)口蹄疫A型和O型兩種獨(dú)立抗原的、更安全的VLP疫苗。

發(fā)明內(nèi)容