[發(fā)明專利]表達(dá)牛病毒性腹瀉E2基因的重組牛結(jié)節(jié)疹病毒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110760588.0
• 申請日: 2021-07-06
• 公開（公告）號: CN113388587B
• 公開（公告）日: 2023-09-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賀筍;李俊輝;潘毅平;趙毅;程蘭玲;張偉;王雨朦;霍新亮;高揚(yáng)毅;王馬軍
• 申請（專利權(quán)）人: 天康制藥股份有限公司
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;C12N15/40;C12N15/63;A61K39/275;A61K39/12;A61P31/14;A61P31/20
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本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種表達(dá)牛病毒性腹瀉E2基因的重組牛結(jié)節(jié)疹病毒及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的重組牛結(jié)節(jié)疹病毒，含有如SEQ?ID?NO.1所示的牛病毒性腹瀉E2基因，該重組病毒既保留了牛結(jié)節(jié)疹病毒的抗原，又表達(dá)有牛病毒性腹瀉E2抗原，可直接作為活疫苗進(jìn)行接種，無需滅活和佐劑乳化等工藝，對牛結(jié)節(jié)疹病毒和牛病毒性腹瀉病毒具有良好的免疫原性，能夠同時(shí)實(shí)現(xiàn)對牛病毒性腹瀉或牛結(jié)節(jié)性皮膚病的預(yù)防，可通過商品化的鑒別診斷試劑盒鑒別診斷疫苗免疫和野毒感染，為疫病的進(jìn)化提供物質(zhì)保障。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種表達(dá)牛病毒性腹瀉E2基因的重組牛結(jié)節(jié)疹病毒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

牛病毒性腹瀉(粘膜病)，是由牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)引起牛的以粘膜發(fā)炎、糜爛、壞死和腹瀉為特征的疾病。該病癥傳染性極強(qiáng)，不僅可感染牛，也可感染山羊和綿羊等反芻動物。母畜在受精時(shí)或胚胎發(fā)育時(shí)期內(nèi)感染牛病毒性腹瀉病，均可導(dǎo)致胚胎出現(xiàn)死亡或出現(xiàn)畸形胎。而產(chǎn)奶期若出現(xiàn)感染，則會導(dǎo)致產(chǎn)奶量下降，進(jìn)一步降低乳制品的質(zhì)量，甚至可能引起人畜交叉?zhèn)魅?，對于養(yǎng)殖者的經(jīng)濟(jì)和生命都會造成一定威脅。

結(jié)節(jié)性皮膚病(Lumpy?skin?disease，LSD)又稱牛結(jié)節(jié)疹，牛結(jié)節(jié)性皮炎或牛疙瘩皮膚病，是由痘病毒科的結(jié)節(jié)性皮膚病病毒(Lumpy?Skin?Disease?Virus，LSDV)引起的一種急性、亞急性或慢性傳染病。感染該疾病的牛會發(fā)生消瘦，牛奶產(chǎn)量下降，皮張鞣制后具有凹陷或孔洞而導(dǎo)致其利用價(jià)值大大降低，造成極大的經(jīng)濟(jì)損失。

目前，對于上述兩種疾病以疫苗預(yù)防為主，對于預(yù)防結(jié)節(jié)性皮膚病疫苗的常規(guī)制備方法為：將牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒接種到羊睪丸細(xì)胞上，依次經(jīng)過培養(yǎng)、提取、滅活、添加佐劑等步驟后制備得到疫苗。

對于預(yù)防牛病毒性腹瀉疫苗的常規(guī)制備方法主要包括兩種：一種是將牛病毒性腹瀉病毒接種到DMBK細(xì)胞上，依次經(jīng)過培養(yǎng)、提取、滅活、添加佐劑等步驟后制備得到疫苗；另外一種是利用CHO細(xì)胞直接表達(dá)牛病毒性腹瀉E2蛋白，依次經(jīng)過提取純化、添加佐劑等步驟后制備得到疫苗。

但是上述兩種疫苗的制備的方法中都需要經(jīng)過滅活和添加佐劑乳化的步驟，而且采用上述疫苗對牛進(jìn)行免疫后只能實(shí)現(xiàn)對牛病毒性腹瀉或結(jié)節(jié)性皮膚病其中一個(gè)的預(yù)防，即單個(gè)疫苗無法實(shí)現(xiàn)對以上兩種疾病的同時(shí)預(yù)防。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一目的在于提供一種重組牛結(jié)節(jié)疹病毒，該重組牛結(jié)節(jié)疹病毒含有牛病毒性腹瀉病毒E2基因，既表達(dá)有牛結(jié)節(jié)疹病毒的抗原，又表達(dá)有牛病毒性腹瀉E2基因的抗原，可直接作為活疫苗進(jìn)行接種，無需滅活和佐劑乳化等工藝。

本發(fā)明的第二目的在于提供一種重組牛結(jié)節(jié)疹病毒的制備方法，該制備方法簡單，成本低。

本發(fā)明的第三目的在于提供一種重組牛結(jié)節(jié)疹病毒的培養(yǎng)方法。

本發(fā)明的第四目的在于提供一種重組牛結(jié)節(jié)疹病毒的應(yīng)用。

本發(fā)明的第五目的在于提供一種預(yù)防牛結(jié)節(jié)疹和牛病毒性腹瀉的疫苗，該疫苗對于牛結(jié)節(jié)疹病毒和牛病毒性腹瀉病毒具有良好的免疫原性，能夠同時(shí)實(shí)現(xiàn)對牛病毒性腹瀉和結(jié)節(jié)性皮膚病的預(yù)防。

本發(fā)明的第六目的在于提供一種疫苗的制備方法，該制備方法簡單快捷，無需滅活和添加佐劑。

第一方面，本發(fā)明提供了一種重組牛結(jié)節(jié)疹病毒，所述重組牛結(jié)節(jié)疹病毒為含有牛病毒性腹瀉E2基因的牛結(jié)節(jié)疹病毒；所述牛病毒性腹瀉E2基因的核苷酸序列如SEQ?IDNO.1所示。

作為進(jìn)一步技術(shù)方案，所述牛病毒性腹瀉E2基因插入在牛結(jié)節(jié)疹病毒的TK基因中，片段連接方式為TK2-第一啟動子-E2-TK1；

優(yōu)選地，所述第一啟動子包括p7.5或p11；