[發明專利]一種CRISPR-SaCas9基因編輯系統及其應用有效
| 申請號： | 202110756753.5 | 申請日： | 2021-07-05 |
| 公開（公告）號： | CN113549650B | 公開（公告）日： | 2023-05-09 |
| 發明（設計）人： | 張孝兵;程濤;張健萍;楊智學;傅雅文 | 申請（專利權）人： | 天津協和生物科技開發有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/90;C12N15/62;C12N5/10;A61K48/00;A61K38/46 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 劉二艷 |
| 地址： | 300020 *** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 crispr sacas9 基因 編輯 系統 及其 應用 | ||
1.一種CRISPR-SaCas9基因編輯系統，其特征在于，所述CRISPR-SaCas9基因編輯系統包括：SaCas9載體、sgRNA載體和同源重組模板pDonor載體；
其中，所述SaCas9載體包括啟動子、SaCas9編碼基因、核定位信號HMGA2和BPNLS、Wpre和PolyA，所述核定位信號HMGA2和BPNLS分別為編碼如SEQ?ID?NO.2和6所示的氨基酸序列的核酸；
所述sgRNA載體包括啟動子、靶向序列和骨架結構；
所述靶向序列的長度為21或22nt；
所述sgRNA載體的骨架結構的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.19所示。
2.根據權利要求1所述的CRISPR-SaCas9基因編輯系統，其特征在于，所述SaCas9編碼基因與核定位信號的連接序列為SEQ?ID?NO.16～18所述的核苷酸序列中的任意一種或至少兩種的組合；
所述連接序列連接于SaCas9編碼基因的N端和/或C端。
3.根據權利要求1所述的CRISPR-SaCas9基因編輯系統，其特征在于，所述SaCas9載體的啟動子為EF1啟動子、CAG啟動子或CMV啟動子中的任意一種。
4.根據權利要求1所述的CRISPR-SaCas9基因編輯系統，其特征在于，所述SaCas9編碼基因編碼的蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.15所示。
5.根據權利要求1所述的CRISPR-SaCas9基因編輯系統，其特征在于，所述sgRNA載體的啟動子為U6啟動子。
6.根據權利要求1所述的CRISPR-SaCas9基因編輯系統，其特征在于，所述同源重組模板pDonor載體包含供體DNA。
7.根據權利要求1～6任一項所述的CRISPR-SaCas9基因編輯系統，其特征在于，所述SaCas9載體為質粒、腺病毒載體或慢病毒載體的任意一種；
所述sgRNA載體為質粒、腺病毒載體或慢病毒載體的任意一種；
所述同源重組模板pDonor載體為質粒、腺病毒載體或慢病毒載體的任意一種。
8.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞包含如權利要求1～7任一項所述的CRISPR-SaCas9基因編輯系統。
9.根據權利要求8所述的宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞為人原代細胞；
所述人原代細胞為人誘導多能干細胞、人原代T細胞或人造血干細胞中的任意一種。
10.如權利要求1～7任一項所述的CRISPR-SaCas9基因編輯系統在制備基因編輯的藥物中的應用。
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