[發明專利]一種檢測爆炸物的光合細菌及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110755122.1
• 申請日: 2021-07-05
• 公開（公告）號: CN113373102B
• 公開（公告）日: 2022-09-09
• 發明（設計）人: 楊建明;梁波;張鑫平;湯若昊;王兆寶;李美潔
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/31;C12N15/65;C07K14/21;G01N21/64;C12R1/38
• 代理公司: 青島合創知識產權代理事務所(普通合伙) 37264
• 代理人: 王曉曉

1.一種檢測爆炸物的光合細菌的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括以下步驟：

（1）根據沼澤紅假單胞菌的轉錄調控蛋白的氨基酸序列獲得其編碼的核苷酸序列，再查找其上游啟動該編碼核苷酸序列的啟動子的核苷酸序列；

所述轉錄調控蛋白具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；

所述啟動子具有如SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列或如SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列；

（2）將所述啟動子的核苷酸序列與熒光報告基因分別經純化、回收、酶切后相互連接，并轉化沼澤紅假單胞菌，鑒定陽性后得到工程菌株；

（3）活化所述工程菌株，得到光合細菌。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述熒光報告基因為綠色熒光蛋白編碼基因gfp，其核苷酸序列如SED ID NO.5 所示。

3.權利要求1所述的制備方法制備得到的光合細菌。

4.利用權利要求3所述的光合細菌制備得到的沼澤紅假單胞菌生物傳感器。

5.權利要求4所述的沼澤紅假單胞菌生物傳感器在爆炸物分子檢測中的應用。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述沼澤紅假單胞菌生物傳感器的使用方法為：將所述沼澤紅假單胞菌生物傳感器活化后，加入待測樣品，培養2h-8h后，于激發光是485 nm、發射光是525 nm的條件下，利用酶標儀檢測待測樣品的熒光強度RFU值，出現熒光，說明待測樣品中存在爆炸物分子，且熒光強度越強，說明待測樣品中爆炸物分子的濃度越高。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述沼澤紅假單胞菌生物傳感器能夠感應到的爆炸物分子的最低檢測限濃度為0.001 mg/L -0.005 mg/L。

8.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述爆炸物分子為2,4-DNT。