[發明專利]一種鑒定橄欖油摻雜的檢測方法

在審

• 申請號: 202110751993.6
• 申請日: 2021-07-02
• 公開（公告）號: CN113667724A
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發明（設計）人: 李健
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 廈門創象知識產權代理有限公司 35232
• 代理人: 王鳳玲;尤懷成

本發明公開了一種鑒定橄欖油摻雜的檢測方法，包括以下步驟：步驟一、引物設計：針對NCBI庫中棕櫚脂肪酸合成的基因設計并篩選；步驟二、待檢測橄欖油的DNA提取；步驟三、實時熒光定量PCR反應：在所述待檢測DNA油樣中加入引物對GL1、GL2、EO1、EO2及TY2進行擴增，以在40個循環內是否讀取到Ct值為標準，判斷是否得到陽性擴增，據此判斷橄欖油是否摻雜。本發明能夠有效的從橄欖油中鑒別出摻入的其他油品。

技術領域

本發明涉及生物檢測的技術領域，尤其涉及一種鑒定橄欖油摻雜的檢測方法。

背景技術

橄欖油以其獨特的理化特性和營養價值越來越受到人們的青睞，其不飽和脂肪酸高達 82％-87％，油酸、亞油酸、亞麻油酸含量的比例是最適合人體需要的比例。橄欖油具有抗氧化、預防癌癥、美容等功效，價格比其他植物油要高得多。然而有的高價的橄欖油中會摻入低價的植物油或者其他初榨橄欖油及橄欖油果渣等。這種摻假油單從顏色、氣味等外觀上很難進行辨別真偽，嚴重損害了消費者的健康和權益。因此，為保障消費者的權益和健康，開發一種橄欖油真偽的鑒定方法，對控制食品質量安全和杜絕橄欖油摻假事件有著重要意義。

近年來，橄欖油摻雜的鑒定技術主要有原子轉換質譜、核磁共振、光譜分析、高效液相色譜及其他方法。然而，由于橄欖油的化學組成成分隨著生長季節及環境的變化而變化，通過理化方法無法準確鑒別橄欖油真偽。由于精煉食用植物油經過脫膠、脫酸、脫色等復雜的加工過程，其核酸遭到嚴重的破壞，含量非常低，再加上植物油的主要成分是脂類物質，水溶性的DNA含量相當少且質量差。提取時經常會遇到提不到DNA或是提到少量DNA 但卻擴增不出來的各種情況。因此，提取橄欖油中DNA的重點在于如何有效、方便的富集和提取橄欖油中DNA。橄欖油中殘留的微量核酸說明代表物種特異性的基因可能被保留下來，不同物種其遺傳性質都有不同的特異性，可通過檢驗其特異性基因來鑒別物種。因此基于DNA分析的分子生物學方法為鑒定橄欖油摻雜的檢測提供了有力保障。

有鑒于此，本發明人研究和設計了一種鑒定橄欖油摻雜的檢測方法。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鑒定橄欖油摻雜的檢測方法。

為了實現上述目的，本發明解決其技術問題所采取的技術方案是：

一種鑒定橄欖油摻雜的檢測方法，包括以下步驟：

步驟一、引物設計：針對NCBI庫中棕櫚脂肪酸合成的基因設計并篩選：

針對橄欖油，篩選出第一引物對GL1及第二引物對GL2,所述第一引物對GL1包括上游引物GL1F及下游引物GL1R，所述第二引物對GL2包括上游引物GL2F及下游引物GL2R，所述GL1F、GL1R、GL2F、GL2R的核苷酸堿基序列分別如序列表SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:4所示；

針對目標檢測物，篩選出第一引物對EO1及第二引物對EO2，所述第一引物對EO1及第二引物對EO2根據實際目標檢測物的NCBI庫中棕櫚脂肪酸合成的基因設計并篩選得到；

作為實時熒光定量PCR的內參，采用引物對TY2，所述引物對TY2包括上游引物TY2F及下游引物TY2R，所述TY2F及所述TY2R的核苷酸堿基序列分別如序列表SEQ ID NO:5 及SEQ ID NO:6所示；

步驟二、待檢測橄欖油的DNA提取：采用質粒抽提試劑盒提取，得到待檢測DNA油樣；

作為實施例的優選方式，所述質粒抽提試劑盒采用上海碧云天生物技術有限公司生產銷售的質粒抽提試劑盒D0026。

步驟三、實時熒光定量PCR反應：在所述待檢測DNA油樣中加入引物對GL1、GL2、EO1、EO2及TY2進行擴增，以在40個循環內是否讀取到Ct值為標準，判斷是否得到陽性擴增，據此判斷橄欖油是否摻雜。