[發(fā)明專利]一種用于診斷乳腺癌的雞尾酒免疫組化試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110749985.8
• 申請(qǐng)日: 2021-07-02
• 公開（公告）號(hào): CN113295871B
• 公開（公告）日: 2023-07-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳鵬;李三華;牛銀銀;楊瀟燕;米貫勛;崔紅米;劉暢;齊華;劉文弟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南賽諾特生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/574;G01N33/68
• 代理公司: 鄭州睿信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41119
• 代理人: 郭佳效

1.一種用于診斷乳腺癌的雞尾酒免疫組化試劑盒，其特征在于，包括過氧化物酶封閉劑、組合一抗、組合二抗、DAB顯色底物、DAB顯色緩沖液、快紅顯色劑、快紅顯色活化劑、快紅緩沖液以及蘇木素復(fù)染液，其中，所述組合一抗包括鼠抗人細(xì)胞角蛋白7單克隆抗體、鼠抗人P63單克隆抗體和兔抗人MHC單克隆抗體；所述組合二抗包括HRP標(biāo)記的抗鼠二抗聚合物和AP標(biāo)記的抗兔二抗聚合物；所述乳腺癌為浸潤性乳腺癌。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述組合一抗中鼠抗人細(xì)胞角蛋白7單克隆抗體克隆號(hào)為EP16，鼠抗人P63單克隆抗體克隆號(hào)為MyR1-P63，兔抗人MHC單克隆抗體克隆號(hào)為SMMS-1。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述組合一抗中鼠抗人細(xì)胞角蛋白7單克隆抗體效價(jià)為1:50-1:400，鼠抗人P63單克隆抗體效價(jià)為1:50-1:300，兔抗人MHC單克隆抗體效價(jià)為1:50-1:350。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述組合一抗還包括三羥甲基氨基甲烷、牛血清蛋白、氯化鈉、果綠色素以及Proclin950。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述組合一抗還包括6g/L的三羥甲基氨基甲烷、10g/L的牛血清蛋白、8g/L的氯化鈉、0?.2g/L的果綠色素以及質(zhì)量濃度為0?.15％的Proclin950。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述組合二抗中HRP標(biāo)記的抗鼠二抗聚合物的濃度為8-15μg/mL，AP標(biāo)記的抗兔二抗聚合物的濃度為6-12μg/mL。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述組合二抗還包括三羥甲基氨基甲烷、氯化鈉、牛血清蛋白、吐溫20、Proclin950。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述組合二抗還包括6g/L的三羥甲基氨基甲烷、8g/L的氯化鈉、5g/L的牛血清蛋白、質(zhì)量濃度為0?.1％的吐溫20、質(zhì)量濃度為0.1％的Proclin950。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，其適用于全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述全自動(dòng)免疫組化染色機(jī)的染色程序包括如下步驟：

1)石蠟組織切片脫蠟水化；

2)抗原修復(fù)：采用抗原修復(fù)緩沖液對(duì)切片進(jìn)行高壓修復(fù)，溫度為100℃，修復(fù)20分鐘，加樣量100微升；

3)滴加3％～3?.5％的過氧化物酶封閉劑進(jìn)行內(nèi)源性過氧化物酶的封閉，常溫孵育5分鐘，加樣量為100微升；

4)組合一抗的孵育：37℃孵育30-60分鐘，加樣量為100微升；

5)組合二抗的孵育：37℃孵育25-30分鐘，加樣量為100微升；

6)快紅顯色液的孵育：常溫孵育8分鐘，加樣量為100微升；快紅顯色劑的配置：快紅顯色劑、快紅顯色活化劑和快紅緩沖液按照1：1：30的比例配置所得；

7)DAB顯色液的孵育：常溫孵育5分鐘，加樣量為100微升；DAB顯色液的配置：DAB顯色底物和DAB顯色緩沖液1：20比例配制所得；

8)襯染：蘇木素常溫孵育1?.5分鐘，加樣量為100微升；

9)水性封片膠封片。