[發明專利]一種從固氮藍藻中分離純化高純度藻膽蛋白的方法及藻膽蛋白

在審

• 申請號: 202110747801.4
• 申請日: 2021-07-02
• 公開（公告）號: CN113292648A
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 季亮;范建華;陳成;鄭伊奕
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C07K14/795
• 分類號: C07K14/795;C07K14/195;C07K1/14;C07K1/16;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 上海華工專利事務所(普通合伙) 31104
• 代理人: 繆利明;趙孟琴

1.一種從固氮藍藻中分離純化高純度藻膽蛋白的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、取一株固氮藍藻，接種于BG11培養基中，光照培養，離心收集藻液，二次離心，去上清，獲得藻體；將藻體重懸于PBS緩沖液中，獲得PBS藻體重懸液；

步驟二、反復凍融步驟一中所述的PBS藻體重懸液，獲得藻細胞破碎液，離心獲得藻膽蛋白粗提液；

步驟三、將步驟二中的藻膽蛋白粗提液加入到雙水相體系中，平衡后取上相，即為初步純化藻膽蛋白提取液；

步驟四、步驟三的藻膽蛋白提取液采用羥基磷灰石柱進行純化獲得藻膽蛋白純化液，然后經透析除鹽獲得微藻藻膽蛋白，其中，羥基磷灰石柱，采取不同離子梯度進行等度洗脫。

2.如權利要求1的從固氮藍藻中分離純化高純度藻膽蛋白的方法，其特征在于，步驟四所述的羥基磷灰石柱是采取離子強度為0.01-0.03M氯化鈉的pH 7.2的磷酸鹽緩沖液進行等度洗脫收集紅色的藻紅蛋白，采取離子強度為0.04-0.05M的pH 7.2的磷酸鹽緩沖液進行等度洗脫收集藍色的藻藍蛋白。

3.如權利要求2的從固氮藍藻中分離純化高純度藻膽蛋白的方法，其特征在于，洗脫速度為18-20mL/h。

4.如權利要求1的從固氮藍藻中分離純化高純度藻膽蛋白的方法，其特征在于，步驟四是將步驟三的藻膽蛋白提取液采用0.01M、pH為7.0、3-5倍柱體積的磷酸鹽緩沖液平衡羥基磷灰石層析柱，平衡后，將預處理后的藻膽蛋白提取液上樣至平衡好的羥基磷灰石柱，上樣量為2.5-3.0mL，經純化后獲得藻膽蛋白純化液。

5.如權利要求1的從固氮藍藻中分離純化高純度藻膽蛋白的方法，其特征在于，步驟四還包括對藻膽蛋白純化液進行顏色觀察，收集紅色組分得到藻紅蛋白，收集藍色組分得到藻藍蛋白。

6.如權利要求1的從固氮藍藻中分離純化高純度藻膽蛋白的方法，其特征在于，步驟一的光照培養的光照條件為50-75μmol/m2/s，光源為LED燈，光暗循環為24/0h，優選外源添加100-200mM的檸檬酸鈉。

7.如權利要求1的從固氮藍藻中分離純化高純度藻膽蛋白的方法，其特征在于，步驟一的PBS緩沖液的pH為6.8-7.5，濃度為20mM。

8.如權利要求1的從固氮藍藻中分離純化高純度藻膽蛋白的方法，其特征在于，所述步驟二中所述的凍融的次數為4-6次，凍融溫度為-20℃冷凍，0-4℃融化完全。

9.如權利要求1的從固氮藍藻中分離純化高純度藻膽蛋白的方法，其特征在于，所述步驟三中所述的雙水相體系為PEG/無機鹽體系，PEG分子量為1000-4000。

10.一種藻膽蛋白，其是采用如權利要求1-9任一項所述的從固氮藍藻中分離純化高純度藻膽蛋白的方法制備獲得。