[發(fā)明專(zhuān)利]一種蠶蛹肽及其制備和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110739207.0
• 申請(qǐng)日: 2021-06-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113278669B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-06-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉小玲;沈圓圓;王成華;秦雅莉;于福田;盧美杉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣西大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): C12P21/00
• 分類(lèi)號(hào): C12P21/00;C12N1/20;C07K1/30;A61P29/00;C12R1/07
• 代理公司: 廣西南寧公平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 45104
• 代理人: 黃宗全

本發(fā)明公開(kāi)一種蠶蛹肽及其制備和應(yīng)用，屬于抗炎藥物或功能食品制備技術(shù)領(lǐng)域。該制備方法以蠶蛹為原料，經(jīng)過(guò)脫脂后采用堿溶酸沉法獲取蠶蛹蛋白粉，再將蠶蛹蛋白粉通過(guò)納豆菌液態(tài)發(fā)酵制備蠶蛹肽；采用LPS(脂多糖)誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞建立細(xì)胞炎癥模型，對(duì)所制得的蠶蛹肽進(jìn)行體外抗炎活性研究。研究結(jié)果表明蠶蛹肽對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞無(wú)毒性，并且對(duì)細(xì)胞有顯著的增殖作用；蠶蛹肽可顯著抑制LPS(脂多糖)誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞上清液中N0分泌，且呈劑量依賴(lài)性。本發(fā)明可制得大量蠶蛹肽，整體工藝簡(jiǎn)單，易于推廣。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于抗炎藥物或功能食品制備技術(shù)領(lǐng)域，涉及微生物發(fā)酵法制備生物活性肽，具體涉及一種蠶蛹肽及其制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)

我國(guó)有著悠久的種桑養(yǎng)蠶歷史，是世界上最大的絲綢生產(chǎn)國(guó)家。蠶蛹作為絲綢工業(yè)的副產(chǎn)品，由于深加工技術(shù)缺乏，經(jīng)常被用作肥料、動(dòng)物飼料或直接丟棄。蠶蛹因其高脂肪酸易發(fā)生氧化反應(yīng)，可能造成環(huán)境污染和異味。蠶蛹含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂肪酸和維生素等。蠶蛹蛋白質(zhì)由18種氨基酸組成，其中8種必需氨基酸占氨基酸總量的42％，是良好的生物肽來(lái)源。目前，研究發(fā)現(xiàn)蠶蛹蛋白源生物肽具有抗氧化、降血壓、降血脂、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等功能活性，對(duì)它們的抗炎活性幾乎沒(méi)有研究。因此，制備蠶蛹抗炎肽對(duì)提高蠶蛹資源利用率和產(chǎn)品附加值具有重要意義。

炎癥是機(jī)體應(yīng)對(duì)刺激的一種防御反應(yīng)，保護(hù)機(jī)體免受有害刺激。然而，當(dāng)炎癥不受控制時(shí)，可能會(huì)導(dǎo)致自身免疫性疾病、自身炎癥性疾病、神經(jīng)退行性疾病或癌癥。目前，甾體抗炎藥和非甾體抗炎藥被廣泛用于炎癥的治療，但長(zhǎng)期使用會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生多種嚴(yán)重的副作用，例如胃腸道損傷，特別是消化性潰瘍穿孔或消化道出血等。因此，開(kāi)發(fā)成本低、安全性高和效果好的新型抗炎藥物已成為炎癥性疾病治療的迫切需求。

食源性生物肽具有來(lái)源廣泛、吸收速度快、安全性高、無(wú)副作用等優(yōu)點(diǎn)，在炎癥性疾病的防治中具有廣闊的應(yīng)用前景。近年來(lái)，各種食物蛋白已被用于制備抗炎肽，例如乳清蛋白、鱘魚(yú)、玉米醇溶蛋白和大豆等，并且多以酶解法制備抗炎肽。然而，關(guān)于蠶蛹蛋白源抗炎肽的研究幾乎沒(méi)有。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種蠶蛹肽及其制備和應(yīng)用，可應(yīng)用在抗炎藥物、功能食品、農(nóng)業(yè)深加工等領(lǐng)域。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種蠶蛹肽及其制備方法，其特征在于以蠶蛹為原料，將蠶蛹經(jīng)脫脂后采用堿溶酸沉法獲得蠶蛹蛋白粉，然后使用納豆菌液態(tài)發(fā)酵獲得蠶蛹肽。

所述的脫脂按以下步驟進(jìn)行：將蠶蛹勻漿后凍干，然后過(guò)80目篩，取蠶蛹粉置于7-9倍體積的正己烷中，40-50℃條件下磁力攪拌3-5h，離心棄上清液，通風(fēng)櫥晾干，即為脫脂蠶蛹粉。

所述的堿溶酸沉法按以下步驟進(jìn)行：將脫脂蠶蛹粉配制成5-15％(m/v)的懸濁液，用1mol/L?NaOH調(diào)pH至10.0，40-50℃攪拌3-5h，5000-9000r/min離心處理10-30min，收集上層清液用1mol/L?HCl調(diào)pH至4.0，再5000-9000r/min離心處理10-30min，收集沉淀，然后取沉淀用蒸餾水復(fù)水脫鹽，冷凍干燥，即為蠶蛹蛋白粉。

所述的納豆菌液態(tài)發(fā)酵按以下步驟進(jìn)行：取納豆菌接入種子培養(yǎng)基，放入37℃、120-200r/min搖床振蕩培養(yǎng)6-34h，制得10⁷-10⁸CFU/mL的種子液，種子液以1-7％(v/v)的接種量接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中，初始pH值5-9，并置于30-45℃溫度下進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，培養(yǎng)24-40h后終止發(fā)酵，5000-9000r/min和4℃條件下離心10-30min以除去菌體沉淀和未利用的蠶蛹蛋白殘?jiān)∩锨逡河?.22-0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，并將其冷凍干燥，即得蠶蛹肽。

所述的種子培養(yǎng)基按以下方法制備：按蛋白胨：牛肉粉：葡萄糖：蒸餾水為1：3：1：100的質(zhì)量比配制，調(diào)節(jié)pH至7.0，放入121℃高壓滅菌鍋滅菌20min，制得種子培養(yǎng)基。