[發(fā)明專利]一株解淀粉芽孢桿菌及其應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110737301.2 | 申請日： | 2021-06-30 |
| 公開（公告）號： | CN113512513B | 公開（公告）日： | 2022-10-25 |
| 發(fā)明（設計）人： | 金明飛;葉天韻;黃靜;楊婷;馬妍;吳雅婷;常忠義 | 申請（專利權）人： | 華東師范大學 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20;C12N1/21;C12N9/10;C12N15/75;C12R1/07 |
| 代理公司： | 上海德禾翰通律師事務所 31319 | 代理人： | 夏思秋 |
| 地址： | 200241 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一株解 淀粉 芽孢 桿菌 及其 應用 | ||
1.一種解淀粉芽孢桿菌，其特征在于，所述菌株的分類命名為解淀粉芽孢桿菌
2.如權利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌在作為宿主表達1,4-α-葡聚糖分支酶基因中的應用。
3.一種重組菌，其特征在于，所述重組菌以權利要求1所述解淀粉芽孢桿菌為宿主表達編碼目的蛋白的基因。
4.如權利要求3所述的重組菌，其特征在于，所述目的蛋白為1,4-α-葡聚糖分支酶，所述1,4-α-葡聚糖分支酶的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。
5.一種重組菌的構建方法，其特征在于，所述方法具體包括以下步驟：
步驟一、培養(yǎng)如權利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌：
挑取經(jīng)過活化穩(wěn)定培養(yǎng)的解淀粉芽孢桿菌單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)，按照培養(yǎng)基體積的1-2%取解淀粉芽孢桿菌的過夜培養(yǎng)物接種于LB+0.5M山梨醇液體培養(yǎng)基中，在30-45°C、150-220rpm轉速下培養(yǎng)3-6h，使得OD600為0.8-1.2，將培養(yǎng)液冰浴5-10min，2-4°C下5000-8000rpm離心2-5min離心收集菌體；
步驟二、制備解淀粉芽孢桿菌的感受態(tài)細胞：
在5000-8000rpm離心8-10min漂洗所述步驟一收集到的菌體，然后將菌體吹懸于0.5M山梨醇+0.5M甘露醇+10%甘油電轉培養(yǎng)基中，即得感受態(tài)細胞；
步驟三、電轉化：
將質(zhì)粒加入所述步驟二得到的感受態(tài)細胞中，加入預冷的電擊杯進行電轉，電擊后立即加入1mL 由LB+0.5M山梨醇+0.38M甘露醇組成的復蘇培養(yǎng)基中，在30-45℃溫度下，150-220rpm搖床上，培養(yǎng)1-3h后涂布于含有質(zhì)粒所攜帶的抗性抗生素的LB培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，30-45℃溫度下培養(yǎng)16-24h后從長出的菌落中篩選轉化成功的菌株。
6.如權利要求5所述的構建方法，其特征在于，步驟一中，所述LB培養(yǎng)基的組分為：胰蛋白胨：10g/L，酵母提取物：5g/L，NaCl：10g/L和25g/L瓊脂粉，最后用蒸餾水補充體系至1L，121℃高溫高壓滅菌15-20min；所述培養(yǎng)基的pH為5.2-8.4。
7.如權利要求5所述的構建方法，其特征在于，步驟三中，所述質(zhì)粒為pHT01、pUB18或pWB980；所述加入質(zhì)粒的量為0.2-2μg；所述含有抗性抗生素的LB培養(yǎng)基中抗生素的終濃度為100-200μg/mL。
8.如權利要求5所述的構建方法，其特征在于，步驟三中，所述電轉時質(zhì)粒添加量為：0.2-2μg；所述電轉儀設置條件為：電壓1.8-2.2kV，電擊時間4.5-5ms，電阻100-200Ω。
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