[發明專利]一種抗凝藥物活性檢測系統及其檢測方法

在審

• 申請號: 202110736167.4
• 申請日: 2021-06-30
• 公開（公告）號: CN115537452A
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發明（設計）人: 楊蕙銘;鄒忠良;賈力揚;宋陽陽;冉楊
• 申請（專利權）人: 重慶鼎潤醫療器械有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/56
• 分類號: C12Q1/56;G01N33/86;G01N33/68
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 陳雍

本發明涉及分子快速檢測技術領域，具體涉及一種抗凝藥物活性檢測系統及其檢測方法。抗凝藥物活性檢測系統，其包括VPACT活化劑和VPACT啟動劑；VPACT活化劑中含有磷脂、V因子活化劑、活化因子X、HEPES和甘露醇，VPACT啟動劑中含有鈣離子。本方案解決了抗凝藥物活性檢測系統受到凝血級聯反應的初始步驟影響的技術問題，可以穩定而可靠地進行直接或間接靶向FXa和/或FIIa的抗凝血藥的療效監測，顯示出廣泛的適用范圍。

技術領域

本發明涉及藥物活性檢測技術領域，具體涉及一種抗凝藥物活性檢測系統及其檢測方法。

背景技術

抗凝藥物被用于治療特定血栓栓塞，普通肝素(又稱肝素，UFH)是使用得較為廣泛的抗凝藥物之一。普通肝素作用機制為：其與抗凝血酶III結合后，更容易與活化的凝血因子IIa、IXa、Xa、XIa、XIIa、Ka等同時結合并抑制這些活化的凝血因子的活性，從而發揮抗凝作用。另外，低分子量肝素(LMWH)由于其安全、方便、有效和副作用小等特點正逐漸取代普通肝素。肝素等抗凝藥物同時作用于眾多凝血因子，而不同個體間的這些凝血因子存在高可變性，維持適當的抗凝藥物水平具有一定難度。因此，在利用肝素等抗凝藥物進行治療和預防時，藥物的抗凝活性監測是非常重要的。

活化部分凝血活酶時間(APTT)是臨床上最常用的反映內源性凝血系統凝血活性的敏感篩選試驗，也是檢測肝素等抗凝藥物的抗凝活性的最常用的檢測方法。但是，傳統的凝血級聯反應的初始步驟較長，對活化部分凝血活酶時間(APTT)及凝血酶原時間(PT)的檢測產生了較大干擾，影響了APTT的檢測準確程度和應用范圍。亟需開發出一種能夠繞開凝血級聯反應的初始步驟的藥物抗凝活性的檢測方法，以及一種針對于抗凝血藥療效的穩定而可靠的檢測系統。

發明內容

本發明意在提供一種抗凝藥物活性檢測系統，以解決抗凝藥物活性檢測系統受到凝血級聯反應的初始步驟影響的技術問題。

為達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種抗凝藥物活性檢測系統，其包括VPACT活化劑和VPACT啟動劑；VPACT活化劑中含有磷脂、V因子活化劑、活化因子X、HEPES和甘露醇，VPACT啟動劑中含有鈣離子。

本方案的原理及優點是：在本方案中，使用VPACT試劑(包括VPACT活化劑和VPACT啟動劑兩個部分)針對于肝素等抗凝藥物在血漿中的抗凝活性進行檢測。VPACT試劑中的V因子活化劑(RVV-V，來源于魯氏蝰蛇毒素)可激活血漿中的凝血因子V(FV)，隨后活化的凝血因子V(FVa)與磷脂(PL)、活化因子X(FXa)和鈣離子一起形成凝血酶原酶復合物。由于RVV-V對FV進行預激活，故凝血酶和纖維蛋白的形成僅取決于FXa和凝血酶(FIIa)的活性，繞過了傳統的凝血級聯反應的初始步驟，從而消除了無論內源性還是外源性凝血因子活化過程的眾多因素干擾，可實現對肝素等直接或間接靶向FXa和/或FIIa抗凝血藥物的抗凝活性監測。

本方案的抗凝藥物活性檢測系統(VPACT)對活化因子X(FXa)或凝血酶抑制藥物的抗凝作用非常敏感。通過本系統可以獲得V因子活化凝血時間(VPACT)指標，通過該指標反應抗凝藥物的凝血活性。據研究數據表明，在各種肝素療效監測中，本方案的抗凝藥物活性檢測系統可以穩定而可靠地進行抗凝血藥療效監測，顯示出廣泛的適用范圍。

進一步，磷脂、HEPES和甘露醇在VPACT活化劑中的質量百分數分別為0.001～0.2％、0.1～3％、0.5～6％；V因子活化劑和活化因子X在VPACT活化劑中的含量分別為1～10U/mL、0.01～0.3U/mL。采用上述組成以及比例的VPACT活化劑可有效對樣品進行活化，為后續的凝血過程做好準備。

進一步，所述鈣離子由氯化鈣提供，氯化鈣在VPACT啟動劑中的質量百分數為0.05～0.6％。采用上述組成的VPACT啟動劑可以有效啟動凝血過程。