[發明專利]一種角膜損傷修復的生物材料及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202110734421.7
• 申請日: 2021-06-30
• 公開（公告）號: CN113425909B
• 公開（公告）日: 2022-12-16
• 發明（設計）人: 傅瑤;嚴丹;孫浩;姚欽科
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬第九人民醫院
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/50;A61L27/54;C12N5/0775
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.脂肪間充質干細胞來源的脫細胞基質在制備角膜結構和功能修復產品中的用途；所述角膜結構和功能修復產品至少具有以下功用：1)促進角膜上皮細胞生長；2)促進角膜缺損修復；3)促進角膜神經修復；4)促進角膜損傷后產生的眼表炎癥吸收；

所述脂肪間充質干細胞來源的脫細胞基質的制備方法，包括獲取脂肪間充質干細胞，傳代培養和脫細胞基質的制備；

所述脫細胞基質的制備包括以下具體步驟：棄去傳代培養后培養皿中所有培養液，用PBS緩沖液潤洗后，加入脫細胞液，靜置，用PBS緩沖液沖洗后加入DNA酶，置于培養箱中培養；最后用PBS緩沖液進行洗滌，置于黑暗中，4℃保存。

2.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，所述獲取脂肪間充質干細胞包括以下具體步驟：取獲得的脂肪組織，洗滌后剪碎，浸泡在消化液中進行消化；消化完成后，離心、留沉淀，即得脂肪間充質干細胞。

3.根據權利要求2所述的用途，其特征在于，所述獲取脂肪間充質干細胞還包括以下特征中的一項或幾項：

a)所述脂肪組織為抽脂或者重瞼手術中獲得的脂肪組織；

b)所述洗滌介質為PBS緩沖液+100U/mL青霉素/鏈霉素；

c)所述消化液為0.1～0.2％的膠原酶A；

d)所述消化的溫度為37℃，消化時間為8～10h；

e)所述離心條件為：轉速1000～1200rpm，時間8～12min。

4.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，所述傳代培養包括以下具體步驟：用培養液重懸獲取的脂肪間充質干細胞，置于培養箱中培養，待細胞長至80％～90％密度時進行傳代，停止傳代后，更換培養液，進行3～4周的培養。

5.根據權利要求4所述的用途，其特征在于，所述傳代培養還包括以下特征中的一項或幾項：

a)所述培養液配方為：DMEM+10％牛血清+100U/mL青霉素/鏈霉素；

b)所述培養箱的培養條件設定為溫度37℃，5％CO₂；

c)所述傳代具體包括以下步驟：棄去培養液，用PBS緩沖液潤洗，加入0.1％胰酶進行消化；用含血清的培養液進行中和后，離心；棄去上清，用培養液重懸，1:3～4傳代；

d)停止傳代后所用培養液配方為：DMEM+10％牛血清+100U/mL青霉素/鏈霉素+50μmol/L維他命C。

6.根據權利要求5所述的用途，其特征在于，所述傳代還包括以下特征中的一項或幾項：

a)所述消化的溫度為37℃，消化時間為8～10h；

b)所述離心條件為：轉速600～1000rpm，時間3～5min；

c)所述培養液配方為：DMEM+10％牛血清+100U/mL青霉素/鏈霉素；

d)所述培養箱的培養條件設定為溫度37℃，5％CO₂。

7.根據權利要求1所述的用途，其特征在于，所述脫細胞基質的制備還包括以下特征中的一項或幾項：

a)所述脫細胞液的配方為0.5％Triton+20mmol/L NH₄OH+PBS緩沖液；

b)所述靜置時間為4～10min；

c)所述DNA酶的濃度為100U/mL；

d)所述PBS緩沖液沖洗次數為2～5次；

e)所述培養箱的培養條件設定為溫度37℃，5％CO₂；

f)置于培養箱培養時間為1～2h。