[發(fā)明專利]一種角膜損傷修復(fù)的生物材料及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110734421.7
• 申請(qǐng)日: 2021-06-30
• 公開（公告）號(hào): CN113425909B
• 公開（公告）日: 2022-12-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 傅瑤;嚴(yán)丹;孫浩;姚欽科
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第九人民醫(yī)院
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36;A61L27/50;A61L27/54;C12N5/0775
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

本發(fā)明提供一種角膜損傷修復(fù)的生物材料，所述角膜損傷修復(fù)的生物材料為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞來源的脫細(xì)胞基質(zhì)。本發(fā)明還提供了該角膜損傷修復(fù)的生物材料的制備方法，包括獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，傳代培養(yǎng)和脫細(xì)胞基質(zhì)的制備。本發(fā)明提供的角膜損傷修復(fù)的生物材料的生物相容性好，來源廣泛，適合于大量生產(chǎn)，而且能夠促進(jìn)角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)角膜缺損修復(fù)；促進(jìn)角膜三叉神經(jīng)軸突再生，恢復(fù)角膜知覺；降低炎癥反應(yīng)；降低后期角膜瘢痕形成，治療修復(fù)甚佳，在促進(jìn)角膜缺損修復(fù)方面具有良好的應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及組織功能及眼科修復(fù)技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種角膜損傷修復(fù)的生物材料及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)

角膜是眼睛最外層的透明層，在良好的視力形成過程中發(fā)揮重要的作用。眼科醫(yī)生在臨床診治過程中最常見的眼部疾病包括眼表擦傷和角膜上皮缺陷。受損的角膜如果不及時(shí)治療，發(fā)展為持續(xù)性角膜上皮缺損后將會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的并發(fā)癥，如眼部感染、發(fā)生基質(zhì)潰瘍、穿孔、瘢痕等，最終影響視力。針對(duì)難治性角膜上皮缺損的病例，臨床醫(yī)生通常會(huì)采取羊膜移植。羊膜移植已被證明對(duì)眼表疾病的治療有顯著療效，其含多種生長(zhǎng)因子和抑制炎癥的蛋白等。但羊膜可能攜帶來自供者的病毒等，存在潛在的傳染病傳播風(fēng)險(xiǎn)。并且羊膜厚度韌性等受供體影響較大，質(zhì)量較難把控。

近年脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞被證明具有減少細(xì)胞凋亡、減輕炎癥反應(yīng)、抑制纖維化、提高組織修復(fù)潛力等重要的生物學(xué)功能，然而其治療眼表損傷的研究局限于結(jié)膜下注射等，此種方式不僅損傷結(jié)膜組織，同時(shí)治療效果欠佳。

本發(fā)明的目的在于提供一種角膜損傷修復(fù)的生物膜材料，它來源于脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，不但生物相容性好，能降低移植后免疫反應(yīng)；來源廣泛，適合于大量生產(chǎn)，而且能夠促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)角膜缺損修復(fù)；降低炎癥反應(yīng)；降低后期角膜瘢痕形成，治療修復(fù)甚佳。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述情況，為彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)所存在的不足，本發(fā)明提供一種生物相容性好，能夠有效促進(jìn)角膜缺損修復(fù)的角膜修復(fù)材料。

本發(fā)明解決問題的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種角膜損傷修復(fù)的生物材料，所述角膜損傷修復(fù)的生物材料為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞來源的脫細(xì)胞基質(zhì)。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞來源的脫細(xì)胞基質(zhì)在制備角膜結(jié)構(gòu)和功能修復(fù)產(chǎn)品中的用途。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種所述脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞來源的脫細(xì)胞基質(zhì)的制備方法，所述制備方法包括獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，傳代培養(yǎng)和脫細(xì)胞基質(zhì)的制備。

進(jìn)一步地，所述獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞包括以下具體步驟：取獲得的脂肪組織，洗滌后剪碎，浸泡在消化液中進(jìn)行消化；消化完成后，離心、留沉淀，即得脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞。

進(jìn)一步地，獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞過程中所述脂肪組織優(yōu)選為抽脂或者重瞼手術(shù)中獲得的脂肪組織。

進(jìn)一步地，獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞過程中所述洗滌介質(zhì)為PBS緩沖液+100U/mL青霉素/鏈霉素。

進(jìn)一步地，獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞過程中所述消化液為0.1～0.2％的膠原酶A。

進(jìn)一步地，獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞過程中所述消化的溫度為37℃，消化時(shí)間為8～10h；

進(jìn)一步地，獲取脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞過程中所述離心條件為：轉(zhuǎn)速1000～1200rpm，時(shí)間8～12min。

進(jìn)一步地，所述傳代培養(yǎng)包括以下具體步驟：用培養(yǎng)液重懸獲取的脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞，置于培養(yǎng)箱中，待細(xì)胞長(zhǎng)至80％～90％密度時(shí)進(jìn)行傳代，停止傳代后，更換培養(yǎng)液，進(jìn)行3～4周的培養(yǎng)。

進(jìn)一步地，傳代培養(yǎng)過程中所述培養(yǎng)液配方為：DMEM+10％牛血清+100U/mL青霉素/鏈霉素。