[發(fā)明專利]一種用于同時檢測蝦急性肝胰腺壞死癥和肝腸孢子蟲的多重RPA引物和探針組合物及檢測方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110732960.7 | 申請日： | 2021-06-29 |
| 公開（公告）號： | CN113234814B | 公開（公告）日： | 2023-08-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 高嵩;馬超;廖磊;王佩;張雪;王昱 | 申請（專利權(quán)）人： | 江蘇海洋大學(xué) |
| 主分類號： | C12Q1/6883 | 分類號： | C12Q1/6883;C12Q1/6893;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京專信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32605 | 代理人： | 郝曉燕 |
| 地址： | 222005 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 用于 同時 檢測 急性 胰腺 死癥 肝腸 孢子 多重 rpa 引物 探針 組合 方法 | ||
1.一種同時檢測蝦急性肝胰腺壞死癥和肝腸孢子蟲的試劑盒，所述試劑盒含有用于同時檢測蝦急性肝胰腺壞死癥和肝腸孢子蟲的多重RPA引物和探針組合物，所述多重RPA引物和探針組合物包括用于檢測蝦急性肝胰腺壞死癥的RPA引物和探針、用于檢測肝腸孢子蟲的RPA引物和探針，其中：
所述用于檢測蝦急性肝胰腺壞死癥的RPA正向引物、反向引物和探針序列分別如SEQID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3，用于檢測蝦急性肝胰腺壞死癥的探針序列的5’端用FITC標(biāo)記，3'端用C3-space進行封閉，距離5'端的30堿基距離處用四氫呋喃取代原有堿基；
所述用于檢測肝腸孢子蟲的RPA正向引物、反向引物和探針序列分別如SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.6，用于檢測肝腸孢子蟲的探針序列的5'端進行DIG標(biāo)記，3'端用C3-space進行封閉，距離5'端30堿基距離處用四氫呋喃取代原有堿基；
用于檢測蝦急性肝胰腺壞死癥和肝腸孢子蟲的反向引物進行Biotin的標(biāo)記。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述多重RPA引物和探針組合物中檢測蝦急性肝胰腺壞死癥的RPA正向引物、反向引物和探針的摩爾比為1:1:0.3，所述用于檢測肝腸孢子蟲的RPA正向引物、反向引物和探針的摩爾比為1:1:0.3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述多重RPA引物和探針組合物中檢測蝦急性肝胰腺壞死癥的RPA正向引物、反向引物和用于檢測肝腸孢子蟲的RPA正向引物、反向引物的摩爾比為3:1，所述檢測蝦急性肝胰腺壞死癥的RPA探針與檢測肝腸孢子蟲的RPA探針的摩爾比為3:1。
4.?根據(jù)權(quán)利要求1-3任意一項所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括dNTP?、ATP、聚集劑PEG?20000、聚合酶Bsu、重組酶UvsX、輔酶UvsY、單鏈結(jié)合蛋白SSB。
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