[發明專利]一種乳制品前處理方法及乳制品中唾液酸的檢測方法

在審

• 申請號: 202110731895.6
• 申請日: 2021-06-28
• 公開（公告）號: CN113567570A
• 公開（公告）日: 2021-10-29
• 發明（設計）人: 袁麗霞;王煜;陳祥松;吳金勇;姚建銘
• 申請（專利權）人: 合肥中科特一健康科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

本發明公開一種乳制品前處理方法及乳制品中唾液酸的檢測方法，涉及質控檢測領域。本發明提供了一種新的乳制品前處理方法，結合現有的檢測方法，可以分別對乳制品中不同形態的唾液酸進行檢測，為研究乳制品中唾液酸的存在形式提供可靠的方法。

技術領域

本發明涉及質控檢測領域，尤其是一種乳制品前處理方法及乳制品中唾液酸的檢測方法。

背景技術

現有檢測對蛋白類唾液酸含量的方法包括步驟：(1)對含蛋白類類唾液酸樣品進行酸水解，得到酸水解產物；(2)對酸水解產物用標記試劑[4,5-亞甲二氧基-1,2-苯二胺二鹽酸鹽(DMB)]進行標記，獲得經標記的混合物；(3)用有機溶劑對所述經標記的混合物進行色譜預處理，獲得預處理的混合物；(4)將所述預處理的混合物上樣于親水相互作用色譜柱，進行色譜分離，獲得含標記的唾液酸的洗脫液；(5)對所述的洗脫液進行檢測，從而獲得所述蛋白的唾液酸含量的測定結果。

目前針對奶粉中唾液酸的檢測方法，是直接將奶粉水溶后采用DMB(4,5亞甲二氧基-1,2-苯二胺二鹽酸鹽)熒光標記，未對奶粉水溶液樣品進行其它處理，因此檢測的為奶粉中唾液酸總量，無法得到奶粉中不同形態唾液酸的含量。

發明內容

基于此，本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種乳制品前處理方法及乳制品中唾液酸的檢測方法。

為實現上述目的，本發明所采取的技術方案為：一種乳制品前處理方法，包括以下步驟：

(1)制備含有唾液酸的乳制品樣品溶液；

(2)取步驟(1)中制備得到的樣品溶液進行超濾離心，取下層清液加入DMB試劑，熒光衍生后得到樣品溶液A；

(3)取步驟(1)中制備得到的樣品溶液加入三氯乙酸，冰水浴后出現蛋白沉淀，將出現蛋白沉淀的樣品溶液進行超濾離心，得到蛋白沉淀；向蛋白沉淀中加入酸水解試劑，加熱水解后迅速冷卻，得到水解液A；取水解液A加入DMB試劑，熒光衍生后得到樣品溶液B；

(4)取步驟(3)中離心后的上清液，加入酸水解試劑，加熱水解后迅速冷卻，得到水解液B；取水解液B加入DMB試劑，熒光衍生后得到樣品溶液C；

(5)取步驟(1)中制備得到的樣品溶液，加入DMB試劑熒光衍生后，超濾離心得到樣品溶液D。

本發明提供了一種新的乳制品前處理方法，結合現有的檢測方法，可以分別對乳制品中不同形態的唾液酸進行檢測，為研究乳制品中唾液酸的存在形式提供可靠的方法。本發明樣品溶液A結合現有的檢測方法，可以檢測游離態唾液酸的含量；本發明樣品溶液B結合現有的檢測方法，可以檢測蛋白結合形態唾液酸的含量；本發明樣品溶液C結合現有的檢測方法，可以檢測游離態唾液酸和低聚糖結合態唾液酸的總含量，減去游離態唾液酸即可得到低聚糖結合態唾液酸；本發明樣品溶液D結合現有的檢測方法，可以檢測總唾液酸的含量；本發明采取的方法可以檢測總唾液酸、游離態唾液酸、低聚糖結合態唾液酸、蛋白結合形態唾液酸的含量，將總唾液酸含量減去游離態唾液酸含量、蛋白結合態唾液酸含量、低聚糖結合態唾液酸含量后即為脂質結合態唾液酸含量。

優選地，所述步驟(1)中乳制品樣品溶液的制備方法為：將不添加唾液酸的乳制品，加入唾液酸，噴干制成乳制品粉末；唾液酸的質量百分含量為乳制品粉末的0.1-0.5％；乳制品粉末加水溶解，得到樣品溶液。乳制品包含發酵酸奶、煉乳、乳清粉、牛奶粉、駝奶粉、羊奶粉、殺菌牛乳中的至少一種。

優選地，所述步驟(2)中，超濾離心所用的超濾離心管的膜孔徑為2000-4000DA，超濾離心的溫度為3-5℃，超濾離心的離心力為3000-5000g，超濾離心的時間為10-20min；下層清液和DMB試劑的體積比為：下層清液：DMB試劑＝1：1-3。