[發明專利]一種高品質的青貯構樹發酵方法

在審

• 申請號: 202110731318.7
• 申請日: 2021-06-30
• 公開（公告）號: CN113444663A
• 公開（公告）日: 2021-09-28
• 發明（設計）人: 陳超;郝俊;張鳴珠;孫文濤;鄭玉龍
• 申請（專利權）人: 貴州大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K30/18;A23K10/30;C12R1/01
• 代理公司: 重慶金橙專利代理事務所(普通合伙) 50273
• 代理人: 唐健玲

本發明公開了一種高品質的青貯構樹發酵方法，包括有選定青貯原料、設置對照組CK和對比組P97、P94和P91、MRS培養基的準備、菌種接種培養、使用鈣圈溶法對菌種分離純化和性能檢測六步驟。本發明通過設置有對照組CK和對比組P97、P94和P91，可在添加不同濃度的玉米淀粉情況下，對構樹青貯過程中存在的微生物種類、以及乳酸菌發酵的比例和內部微生物對乳酸菌發酵的干擾等方面均進行檢測，添加6％濃度的玉米淀粉，可得到較高比例的乳酸菌，且可獲得較高比例的糖乳桿菌，進而獲得純度較高的乳酸菌，提高構樹青貯質量和效率。

技術領域

本發明涉及乳酸菌分離篩選裝置及方法技術領域，具體為一種高品質的青貯構樹發酵方法。

背景技術

構樹,分布在我國大江南北，是東亞地區常見樹種,且構樹生長迅速、適應性強，在平原、丘陵、荒灘等各類地貌下均可成長，經研究表明,構樹體內含有多種黃酮類化合物，具有抗菌抗炎、增強免疫力的作用，為構樹的飼用化、藥用化提供了理論基礎，而傳統野生構樹存在樹葉密生柔毛、適口性差等缺陷，通過青貯這一技術手段，可通過乳酸發酵技術來提升構樹樹葉適口性，為構樹樹葉青貯發酵和飼用化提供了技術支持。

現有的構樹發酵方法存在的缺陷是：

1、現有的構樹發酵方法在構樹青貯發酵過程中無法控制適當比例的可溶性還原糖的添加，導致乳酸菌發酵的比例較低，純度不高，制取效率較低；

2、現有的構樹發酵方法在構樹青貯發酵過程中無法通過調整乳酸菌的發酵程度，調節發酵時的pH值，對有害微生物無法進行有效的抑制繁殖，導致有害生物干擾乳酸菌的發酵質量，進而影響構樹青貯飼料的發酵質量；

3、現有的構樹發酵方法在構樹青貯發酵過程中無法對培養物內部的蛋白予以適當抑制，無法保證乳酸菌的有氧穩定性，進而影響構樹發酵產物的穩定性。

發明內容

本發明的目的在于提供一種高品質的青貯構樹發酵方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種高品質的青貯構樹發酵方法，包括有以下工作步驟:

步驟一：選定青貯原料，青貯原料為第三茬全株雜交構樹，刈割高度離地15cm，自然風干30min后，用鍘草機切碎為1.5-2.5cm小段進行青貯封裝；

步驟二：設置對照組CK和對比組P97、P94和P91，其中P97內部添加濃度為3％的玉米淀粉液，P94內部添加濃度為6％的玉米淀粉液，P91內部添加濃度為9％的玉米淀粉液；

步驟三：MRS培養基的準備:

(A)將10g蛋白胨、5g牛肉粉、4g酵母粉、2g葡萄糖、1ml吐溫80、2g磷酸氫二鉀、5g乙酸鈉、2g檸檬酸三銨、0.2g硫酸鎂、0.05g硫酸錳、15g瓊脂粉加入無菌培養瓶中，隨后添加1000ml蒸餾水中混合均勻；

(B)對(A)中的混合液進行加熱溶解；

(C)利用pH計對(B)中的混合液的酸堿值進行檢測，并將pH調整至5.5-6.7；

(D)將調制好的MRS培養基，并予以編號1-30；

步驟四：菌種接種培養：

(一)將步驟一中切碎的構樹樹葉和編號1-15的MRS培養基分別裝入PVC真空封口袋進行分裝處理，隨后集中高溫滅菌15-20分鐘；

(二)將(一)中的分裝處理后的MRS培養基在實驗室中避光儲存60天后開封。

步驟五：使用鈣圈溶法對菌種分離純化；

(A)將步驟二中發酵好的溶液稀釋；