[發明專利]系列甲基化兒茶素單體的制備方法

在審

• 申請號: 202110730782.4
• 申請日: 2021-06-29
• 公開（公告）號: CN113321636A
• 公開（公告）日: 2021-08-31
• 發明（設計）人: 曾曉雄;張鑫
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C07D311/62
• 分類號: C07D311/62
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種從烏龍茶中制備系列甲基化兒茶素單體的方法。包括如下步驟：以一種中國產烏龍茶為原料，經熱水提取，干燥得到粗提取物。粗提取物經過大孔樹脂A處理之后，得到甲基化兒茶素含量＞20％的組分1。組分1經過Toyopearl HW?40S樹脂處理之后，分別得到純度大于95％的EGCG3”Me和ECG3”Me；純化后的EGCG3”Me和ECG3”Me經過高溫高壓處理后，分別部分異構化為對應的差向異構體GCG3”Me和CG3”Me。處理后的樣品溶液，經過半制備高效液相色譜儀進行分離純化，分別得到EGCG3”Me、ECG3”Me、GCG3”Me和CG3”Me的單體物質。作為一種成本低、效率高、環境友好的制備工藝，本發明易于工業化生產，具有廣闊的應用前景。

技術領域

本發明涉及一種利用吸附柱層析法以及半制備高效液相色譜儀，純化茶葉中的甲基化兒茶素成分，制備系列甲基化兒茶素單體的方法。

背景技術

很久以來，茶葉一直受到人們的喜愛。除了膾炙人口的的色、香、味之外，目前流行病學與預防醫學研究表明喝茶可以降低患腫瘤和心腦血管等疾病的風險。茶還具有抗氧化、抗炎癥、抗過敏和抗肥胖的生理功效。研究發現茶的風味與保健功能正是茶葉所特有的茶多酚等具有生物活性的成分所賦予的。

茶多酚是兒茶素(黃烷醇類)、花色素類(花青素和花白素)、花黃素類(黃酮與黃酮類)等集于茶葉中的一群多酚復合物的總稱。其中兒茶素占60-80％，分為酯型兒茶素和游離型兒茶素，酯型兒茶素占兒茶素的70％左右。酚類物質早就被報道具有多種生理活性，尤其是表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)。近幾年研究發現一些特定的烏龍茶中含有另一種兒茶素，即兒茶素的甲基化衍生物，以(-)-表沒食子兒茶素3-O(3-O-甲基)沒食子酸酯(EGCG3”Me)和(-)-表沒食子兒茶素3-O(4-O-甲基)沒食子酸酯(EGCG4”Me)為主。目前關于甲基化兒茶素生理功能的研究主要集中在對甲基化EGCG的抗過敏作用的研究方面，尤其是對最常見的花粉過敏癥具有顯著的預防和抑制作用。在日本，部分富含甲基化EGCG的產品已經進入商業發展階段，在食品行業，餅干、口香糖、茶飲料等添加甲基化EGCG給食品行業注入了新的賣點，得到了更多消費者的青睞。因此，甲基化兒茶素的研究至關重要，在學術、生物學方面都具有非常重要的意義。

目前，研究報道的甲基化兒茶素的體外合成主要有化學法和生物酶法。但是，化學合成法中需要使用大量有機溶劑和各種基團保護劑，合成反應條件較為苛刻，專一性差，副產物多，因此，化學合成不宜作為甲基化兒茶素的體外合成方法。體外酶法合成雖然專一性強、反應條件溫和、安全性高，但目前甲基化兒茶素的體外轉化研究均沒有對合成反應物進行分離純化與結構解析，沒有實現酶法合成產物的大量制備。

從茶葉中直接提取甲基化兒茶素，由于其來源于天然產物，有著較好的安全性。從食品工業角度看，必須考慮原料充足、方便、易得、無毒性、生產成本低等問題，因此，合理的方法是從茶葉中直接提取甲基化兒茶素。一些中國產烏龍茶中甲基化兒茶素含量較高，結合吸附柱層析法以及半制備高效液相色譜儀，可以制備系列甲基化兒茶素單體。

發明內容

本發明的要解決的技術問題是以中國產烏龍茶作為原料，制備系列甲基化兒茶素單體的方法，能夠保證提取的產品純度高、成本低、效率高、環境友好，且易于實現工業化生產。為解決上述問題，本發明提供了一種從烏龍茶中制備系列甲基化兒茶素單體的方法，包括如下工藝步驟：

1)茶葉經熱水提取，干燥得到粗提取物；

2)采用特定的大孔樹脂A處理粗提取物，先用水充分洗脫，去除色素和咖啡堿；

3)接著用80％濃度的乙醇溶液洗脫大孔樹脂A，收集洗脫液，經濃縮和干燥，得到甲基化兒茶素含量＞20％的組分1；

4)采用Toyopearl HW-40S樹脂處理組分1，用80％濃度的乙醇溶液洗脫，收集不同時間的洗脫液，經濃縮和干燥，分別得到純度大于95％的EGCG3Me和ECG3’Me；