[發明專利]豬偽狂犬病毒LAMP檢測引物組及試劑盒

有效

• 申請號: 202110726270.0
• 申請日: 2021-06-29
• 公開（公告）號: CN113234864B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發明（設計）人: 俞國華;楊小燕;戴愛玲;范克偉;劉建奎;黃翠琴;楊守深;尹會方;李曉華;王鑫;包銀莉
• 申請（專利權）人: 龍巖學院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 福州君誠知識產權代理有限公司 35211
• 代理人: 戴雨君

本發明公開了豬偽狂犬病毒LAMP檢測引物組及試劑盒，豬偽狂犬病毒LAMP檢測引物組包括6條引物，具體核苷酸序列分別如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4、SEQ?ID?NO.5、SEQ?ID?NO.6所示。豬偽狂犬病毒LAMP檢測試劑盒包含上述引物組外，還包含Bst?DNA聚合酶、dNTP、MgSOsubgt;4/subgt;、Betaine、10Ｘ?LAMP反應緩沖液、HNB、陽性對照質粒等成分。本試劑盒具有靈敏度高、特異性好、反應時間短、結果可視化、配套儀器簡單等一系列優點，不僅適用于大型養殖單位和高端實驗室，也適用于廣大中小養殖單位和普通實驗室。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及豬偽狂犬病毒LAMP檢測引物組及試劑盒。

背景技術

豬偽狂犬病(porcine?pseudorabies)是由偽狂犬病毒(pseudorabies?virus，PRV)引起的一種急性傳染病。新生仔豬主要表現為神經癥狀，也可出現腹瀉等消化系統癥狀。成年豬常為隱性感染，妊娠母豬感染后可引起流產、產死胎、木乃伊胎及呼吸系統癥狀。公豬表現為精液品質下降和呼吸系統癥狀。

偽狂犬病在1813年首次發生于美國的牛群中。因該病癥狀與狂犬病顯示，故命名為偽狂犬病。該病是危害養豬業最重要的傳染病之一，廣泛分布于世界各地，造成了巨大的經濟損失。

偽狂犬病毒(PRV)屬于皰疹病毒科，病毒粒子呈球形或橢球形，有囊膜。PRV基因組為線性雙股DNA，約150kb，編碼70-100種蛋白質。

PRV的診斷方法有病毒分離鑒定、免疫熒光檢測病毒抗原、血清中和試驗、酶聯免疫吸附實驗(ELISA)、普通PCR和熒光定量PCR等，其中：病毒分離鑒定太過復雜繁瑣，免疫熒光檢測病毒抗原特異性相對較差，血清中和試驗與ELISA檢測只有在動物產生抗體后才能檢測出來從而導致檢測時間延后，普通PCR檢測需要在擴增完成后通過電泳才能獲得檢測結果，而熒光定量PCR檢測需要使用昂貴的熒光定量PCR儀從而限制了該方法的使用范圍。

LAMP(Loop?Mediated?Isothermal?Amplification，環介導等溫基因擴增技術)是一種新型的核酸擴增技術，在2000年由日本科學家發明。該技術具有靈敏度高、特異性好、反應時間短、結果可視化、配套儀器簡單等一系列優點。利用該技術開發的產品，具有以下兩個優點：(1)配套儀器成本低：一個普通水浴鍋即可完成檢測反應；(2)結果可視化，產品使用范圍大大擴展：不僅大型養殖單位和高端實驗室可以使用，廣大中小養殖單位和普通實驗室也可以使用。

發明內容

為了克服傳統PRV檢測方法固有的缺點，本發明的目的在于提供豬偽狂犬病毒LAMP檢測引物組及試劑盒。

本發明是通過如下技術方案實現的：

首先，選取PRV病毒基因組的保守序列，設計了針對PRV病毒的LAMP檢測引物組，包括6條引物，具體核苷酸序列如下：

SEQ?ID?NO.1(PRV-F3):5′-gtacgtgctcgtgatgacc-3′

SEQ?ID?NO.2(PRV-B3):5′-gcgccagcacaaacagc-3′

SEQ?ID?NO.3(PRV-FIP):5′-cgtcagctccttgatgaccgtgttacctgggactacacgctc-3′

SEQ?ID?NO.4(PRV-BIP):5′-acgcgatctacgtggacggctttccggccgtacgggtt-3′

SEQ?ID?NO.5(PRV-LF):5′-acgtactcggccgcggtg-3′

SEQ?ID?NO.6(PRV-LB):5′-gcccgcgcgcccgtg-3′