[發(fā)明專利]一種檢測新型冠狀病毒的時間分辨熒光免疫試劑盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110722998.6
• 申請日: 2021-06-28
• 公開（公告）號: CN113215107B
• 公開（公告）日: 2022-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 宋旭東;徐部灼;羅樹紅;黃若磐
• 申請（專利權(quán)）人: 瑞博奧（廣州）生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N5/20
• 分類號: C12N5/20;C07K16/10;G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/58
• 代理公司: 廣州廣典知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香;曾銀鳳

本發(fā)明涉及一種檢測新型冠狀病毒的時間分辨熒光免疫試劑盒及其制備方法，其中雜交瘤細胞株COVID19?SRBD?8，保藏編號為CCTCC No：C202167。該雜交瘤細胞制備得到的SARS?CoV?2 S1?RBD單克隆抗體具有高度特異、靈敏度高、效價高等特性，其和市售新型冠狀病毒單克隆抗體，能分別識別SARS?CoV?2S1?RBD抗原的不同表位，兩者在制備顆粒結(jié)合物和充當硝酸纖維素膜上的捕獲劑方面具有良好的表現(xiàn)效果，基于其制備得到的試紙條實現(xiàn)了對常規(guī)樣本中的新型冠狀病毒定量檢測，且重復(fù)性好、精密度強、靈敏度高，還發(fā)現(xiàn)其與核酸檢測結(jié)果有很高的陰陽性符合率，預(yù)示其具有良好的臨床應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是涉及一種檢測新型冠狀病毒的時間分辨熒光免疫試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

抗體的功能取決于其與抗原結(jié)合的表面位點。抗體因結(jié)合表面位點不同而發(fā)揮特定的功能，如激活或抑制活性。了解抗體識別位點有助于評價抗原檢測的精準度。而豐富表面位點的對照抗體，也常用于疫苗效果評估。因此，篩選不同位點抗體，可應(yīng)用于新型冠狀病毒檢測及疫苗保護效力評估等方面。

SARS-Cov-2屬于單股正鏈RNA病毒，基因組分為非結(jié)構(gòu)基因和結(jié)構(gòu)基因。其中非結(jié)構(gòu)基因含有兩個開放閱讀框（ORF1a和ORF1b），編碼16個非結(jié)構(gòu)蛋白（Nsp1到16），而結(jié)構(gòu)基因則編碼4個蛋白：S、E、M、N。

新型冠狀病毒(SARS-CoV-2)四種主要的結(jié)構(gòu)蛋白：刺突蛋白（Spike protein，S蛋白），核衣殼蛋白（Nucleocapsid，N蛋白），膜蛋白（Membrane protein，M蛋白），包膜蛋白（Envelope protein，E蛋白）。新型冠狀病毒刺突蛋白S蛋白有兩個亞基：S1和S2，受體結(jié)合位點（RBD）位于S1亞基上。它以三聚體的形式組成病毒粒子外膜表面的刺突，其主要功能是識別宿主細胞表面受體，介導(dǎo)與宿主細胞的融合。

由新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）引起的COVID-19大流行在世界各地肆虐，并造成數(shù)百萬住院和死亡。全世界的政府和組織一直在史無前例地努力控制其進一步擴散并減輕其對人類生命和經(jīng)濟大屠殺的巨大破壞。需要有效地控制許多工具和策略的組合。最有效的方法之一是快速篩選，檢測和隔離感染者。這種檢測/隔離策略使得非常需要簡單，便攜式和低成本的檢測工具來提供快速的結(jié)果，以便可以立即識別和隔離受感染的人。

關(guān)于SARS-CoV-2的檢測和實驗室測試方法的許多評論已經(jīng)發(fā)表。當前有三種主要的檢測方法已經(jīng)在緊急使用授權(quán)下商業(yè)化。他們每個人都有自己的優(yōu)點和局限性。最廣泛使用的診斷檢測方法是基于病毒核酸的檢測，例如實時逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）和環(huán)介導(dǎo)的等溫擴增。一方面，它們是高度敏感和特異的，另一方面，它們通常很昂貴并且提供結(jié)果的速度很慢。在當前情況下，RT-PCR需要兩到三天的周轉(zhuǎn)時間。如果感染者繼續(xù)從事某些類型的社交活動，并有可能在采樣時間和檢測結(jié)果報告之間將SARS-CoV-2傳播給其他人，則這是不可接受的。對于非傳染性場景的這種積極檢測結(jié)果給受影響的人帶來了不必要的負擔。

血清抗體檢測是另一種已廣泛使用的檢測。已經(jīng)開發(fā)和發(fā)表了大量基于免疫色譜分析的快速血清學檢測方法。他們不是檢測SARS-CoV-2病毒的遺傳特征，而是檢測由對SARS-CoV-2的免疫應(yīng)答產(chǎn)生的抗體。它們主要基于免疫測定，并且通常便宜且易于使用。它們對于篩查，跟蹤和監(jiān)視暴露于SARS-CoV-2的人員非常有用。通常，直到感染的相對晚期才在被感染的人中產(chǎn)生IgM或IgG抗體。IgM通常在受感染的人中出現(xiàn)較早，并隨著IgG的增加而逐漸降低。這些血清學檢測很可能為感染早期的人提供陰性結(jié)果。錯誤的負面結(jié)果會給人以錯誤的安全感，并可能導(dǎo)致結(jié)果擴散更大。