[發(fā)明專利]檢測(cè)藍(lán)舌病病毒、動(dòng)物流行性出血病病毒和帕利亞姆病毒的RT-LAMP引物組及試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110722948.8
• 申請(qǐng)日: 2021-06-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113337643A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李占鴻;楊恒;廖德芳;楊振興;李卓然;李華春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊;于洪

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)藍(lán)舌病病毒、動(dòng)物流行性出血病病毒和帕利亞姆病毒的RT?LAMP引物組及試劑盒，包括引物組Ι、引物組Ⅱ和引物組Ⅲ；引物組I由BTV?F3、BTV?B3、BTV?FIP、BTV?BIP、BTV?LB和BTV?LF組成；引物組II由EHDV?F3、EHDV?B3、EHDV?FIP、EHDV?BIP、EHDV?LB和EHDV?LF組成；引物組III由PALV?F3、PALV?B3、PALV?FIP、PALV?BIP和PALV?LF組成。本發(fā)明RT?LAMP檢測(cè)方法具有高特異性和靈敏度，可快速、準(zhǔn)確的檢測(cè)出BTV、EHDV和PALV，具有重大的推廣價(jià)值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于獸醫(yī)傳染病檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及用于可視化檢測(cè)藍(lán)舌病病毒、動(dòng)物流行性出血病病毒和帕利亞姆病毒的RT-LAMP引物組及試劑盒。

背景技術(shù)

藍(lán)舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)、動(dòng)物流行性出血病病毒(Epizootichaemorrhagic disease virus,EHDV)與帕利亞姆病毒(Palyam virus,PALV)均為庫(kù)蠓傳播的反芻動(dòng)物蟲(chóng)媒病毒，屬于呼腸孤病毒科環(huán)狀病毒屬成員。BTV、EHDV與PALV的基因組均由10個(gè)節(jié)段(Seg-1～Seg-10)的雙鏈RNA(Double stranded RNA,dsRNA)組成，大小約20kb，在遺傳進(jìn)化上具有較近的親緣關(guān)系。

BTV感染綿羊可引起明顯的臨床癥狀，表現(xiàn)為高熱、消瘦、口唇充血腫脹及糜爛、鼻腔和胃腸黏膜出血潰瘍、蹄冠脫落引起跛行等；當(dāng)新血清型BTV傳入時(shí)，感染綿羊的發(fā)病率可達(dá)80％，死亡率高達(dá)40％，嚴(yán)重影響牛羊畜產(chǎn)品的正常國(guó)際貿(mào)易，給牛羊養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，因此世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(Office international des epizooties,OIE)將BT列為法定報(bào)告的動(dòng)物疫病，我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病。EHDV對(duì)鹿和牛具有較強(qiáng)的致病性，臨床癥狀主要表現(xiàn)為：體溫升高、休克、口腔與皺胃黏膜發(fā)生出血與糜爛、蹄冠出血和跛行，妊娠期動(dòng)物出現(xiàn)流產(chǎn)或死胎，奶牛或哺乳期動(dòng)物產(chǎn)奶量急劇減少，因此，EHD被OIE列為法定報(bào)告的跨境動(dòng)物疫病。PALV感染牛羊等反芻動(dòng)物，可引起妊娠期家畜出現(xiàn)生產(chǎn)異常，表現(xiàn)為流產(chǎn)、死胎或腦組織發(fā)育不全的畸形胎等。

我國(guó)幅員遼闊，自然氣候條件復(fù)雜多樣，媒介昆蟲(chóng)活動(dòng)范圍廣，牛羊養(yǎng)殖遍及全國(guó)各地，為牛羊蟲(chóng)媒病毒的流行傳播提供了有利條件。目前世界范圍確認(rèn)了27種BTV血清型(BTV-1～BTV-27)，我國(guó)存在其中12種血清型BTV(BTV-1、-2、-3、-4、-5、-7、-9、-12、-15、-16、-21與-24)的流行，主要分布于云南、廣東、廣西、江蘇、湖南和新疆等省市。目前世界范圍內(nèi)共發(fā)現(xiàn)了9種血清型的EHDV(EHDV-1、-2、-4、-5、-6、-7、-8、-9和-10型)，我國(guó)存在EHDV-1、-5、-6、-7、-10等5種血清型毒株的流行，主要分布于云南、廣東、廣西和內(nèi)蒙等省市。PALV在我國(guó)的流行范圍遍及由南(海南)至北(內(nèi)蒙)，由東(江蘇)至西(新疆)的廣泛區(qū)域流行，流行毒株包括中山病毒(Chuzan virus,CHUV)、Bunyip creek virus(BCV)與D’Aguilarvirus(DAV)等三種血清。BTV、EHDV及PALV在我國(guó)的廣泛流行給我國(guó)牛羊養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展造成嚴(yán)重威脅。

BTV、EHDV及PALV的易感宿主一致，導(dǎo)致的臨床癥狀也較為相似，且病毒間具有較近的遺傳關(guān)系，因此十分有必要開(kāi)發(fā)一種快速、準(zhǔn)確的鑒別方法。目前針對(duì)BTV、EHDV及PALV，已建立了包括RT-PCR和qRT-PCR等多種核酸檢測(cè)方法，但以上方法需要使用PCR儀等復(fù)雜昂貴的儀器，因此主要局限于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，無(wú)法實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。因此如何克服現(xiàn)有技術(shù)的不足是目前獸醫(yī)傳染病檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域亟需解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種用于可視化檢測(cè)藍(lán)舌病病毒、動(dòng)物流行性出血病病毒和帕利亞姆病毒的RT-LAMP引物組及試劑盒。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：