[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)藍(lán)舌病病毒、動(dòng)物流行性出血病病毒和帕利亞姆病毒的RT-LAMP引物組及試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110722948.8
• 申請(qǐng)日: 2021-06-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113337643A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李占鴻;楊恒;廖德芳;楊振興;李卓然;李華春
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 云南省畜牧獸醫(yī)科學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/70
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 昆明正原專(zhuān)利商標(biāo)代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊;于洪

1.檢測(cè)藍(lán)舌病病毒、動(dòng)物流行性出血病病毒和帕利亞姆病毒的引物組，其特征在于：包括引物組Ι、引物組Ⅱ和引物組Ⅲ；

所述引物組I由引物BTV-F3、引物BTV-B3、引物BTV-FIP、引物BTV-BIP、引物BTV-LB和引物BTV-LF組成；

所述引物組II由引物EHDV-F3、引物EHDV-B3、引物EHDV-FIP、引物EHDV-BIP、引物EHDV-LB和引物EHDV-LF組成；

所述引物組III由引物PALV-F3、引物PALV-B3、引物PALV-FIP、引物PALV-BIP和引物PALV-LF組成；

核苷酸序列如表1所示；

表1

。

2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)藍(lán)舌病病毒、動(dòng)物流行性出血病病毒和帕利亞姆病毒的引物組，其特征在于：所述引物組Ⅰ中，BTV-F3、BTV-B3、BTV-FIP、BTV-BIP、BTV-LB和BTV-LF的摩爾比具體可為1：1：3：3：2：2；

所述引物組Ⅱ中，EHDV-F3、EHDV-B3、EHDV-FIP、EHDV-BIP、EHDV-LB和EHDV-LF的摩爾比具體可為1：1：4：4：3：3；

所述引物組Ⅲ中，PALV-F3、PALV-B3、PALV-FIP、PALV-BIP和PALV-LF的摩爾比具體可為1：1：4：4：3。

3.含有權(quán)利要求1或2所述檢測(cè)藍(lán)舌病病毒、動(dòng)物流行性出血病病毒和帕利亞姆病毒的引物組的RT-LAMP試劑盒。

4.如權(quán)利要求3所述的RT-LAMP試劑盒，其特征在于，所檢測(cè)的樣品為分離培養(yǎng)的病毒、牛羊抗凝血液。

5.如權(quán)利要求3所述的RT-LAMP試劑盒，其特征在于，還包括：WarmStart LAMP 2×Master Mix和RNase-free 水。

6.如權(quán)利要求3所述的RT-LAMP試劑盒，其特征在于：

引物組I進(jìn)行RT-LAMP擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：WarmStart LAMP 2× Master Mix 12.5 μL、BTV-F3 1 μL、BTV-B3 1 μL、BTV-FIP 1 μL、BTV-BIP 1 μL、BTV-LF 1 μL、BTV-LB 1 μL，核酸模板2 μL，加入RNase-free 水補(bǔ)足至25 μL；反應(yīng)體系中各引物的終濃度如下：0.2 μMBTV-F3、0.2 μM BTV-B3、0.6 μM BTV-FIP、0.6 μM BTV-BIP、0.4 μM BTV-LF、0.4 μM BTV-LB；

引物組Ⅱ進(jìn)行RT-LAMP擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：WarmStart LAMP 2× Master Mix 12.5 μL、EHDV-F3 1 μL、EHDV-B3 1 μL、EHDV-FIP 1 μL、EHDV-BIP 1 μL、EHDV-LF 1 μL、EHDV-LB1 μL，核酸模板2 μL，加入RNase-free 水補(bǔ)足至25 μL；反應(yīng)體系中各引物的終濃度如下：0.2 μM EHDV-F3、0.2 μM EHDV-B3、0.8 μM EHDV-FIP、0.8 μM EHDV-BIP、0.6 μM EHDV-LF、0.6 μM EHDV-LB；

引物組Ⅲ進(jìn)行RT-LAMP擴(kuò)增的反應(yīng)體系為：WarmStart LAMP 2× Master Mix 12.5 μL、PALV-F3 1 μL、PALV-B3 1 μL、PALV-FIP 1 μL、PALV-BIP 1 μL、PALV-LF 1 μL，核酸模板2 μL，加入RNase-free 水補(bǔ)足至25 μL；反應(yīng)體系中各引物的終濃度如下：0.2 μM PALV-F3、0.2 μM PALV-B3、0.8 μM PALV-FIP、0.8 μM PALV-BIP、0.6 μM PALV-LF。

7.如權(quán)利要求3所述的RT-LAMP試劑盒，其特征在于：RT-LAMP擴(kuò)增的反應(yīng)程序?yàn)椋?4 ℃恒溫45 min。