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[發明專利]水稻色氨酸脫羧酶及其生產方法有效

專利信息
申請號: 202110710832.2 申請日: 2021-06-25
公開(公告)號: CN113430219B 公開(公告)日: 2022-06-07
發明(設計)人: 岳明瑞;謝沛;曹華杰;郭永勝;騰義衛 申請(專利權)人: 新泰市佳禾生物科技有限公司;汕頭市佳禾生物科技有限公司
主分類號: C12N15/60 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N15/70
代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240 代理人: 薛鵬喜
地址: 271200 *** 國省代碼: 山東;37
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 水稻 色氨酸 脫羧酶 及其 生產 方法
【權利要求書】:

1.一種生產水稻色氨酸脫羧酶的方法,其特征在于,包括以下步驟:

(1)將SEQ ID NO.1所示的編碼水稻色氨酸脫羧酶的基因TDC連入質粒pEGX-4t-J,獲得重組表達載體;再將獲得的重組表達載體導入大腸桿菌,獲得重組菌;

(2)將重組菌接種至培養基中進行發酵培養,發酵培養至發酵培養液稀釋100倍后的OD600值為0.18-0.20,獲得發酵培養液;向發酵培養液中加入誘導劑進行誘導培養,獲得誘導培養物;對誘導培養物進行高壓均質處理,制備得到水稻色氨酸脫羧酶;

步驟(1)中,所述質粒pEGX-4t-J是由如下方法構建而成:

以pEGX-4T-1為出發質粒,利用pflmⅠ和btgⅠ分別將質粒pEGX-4T-1的第3250和4869位點進行酶切,酶切之后再連入長度為100bp的人造鏈;所述質粒pEGX-4t-J的長度為3449bp,僅在第3249位點處存在SpeⅠ酶切位點,僅在第3349位點處存在Bsc91Ⅰ酶切位點。

2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)中,所述培養基的組成為:甘油12g/L,酵母膏 5g/L,蛋白胨 5g/L,KH2PO4 2g/L,K2HPO4 15g/L,(NH4)2SO4 1.5 g/L,MgSO4 0.5 g/L,CaCl2 0.015 g/L,ZnCl2 0.06 g/L。

3.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)中,發酵培養的條件為:pH控制在7.0,罐壓0.05MPa,溫度33℃,通風比1:1。

4.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)中,誘導培養的條件為:加入誘導劑IPTG,使IPTG的終濃度100mg/L,誘導溫度22℃,誘導培養時間2-6h。

5.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,步驟(2)中,高壓均質處理的條件為:均質壓力15,000PSI,均質流量400L/Hr,控制溫度為30℃。

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