[發明專利]水稻色氨酸脫羧酶及其生產方法

有效

• 申請號: 202110710832.2
• 申請日: 2021-06-25
• 公開（公告）號: CN113430219B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 岳明瑞;謝沛;曹華杰;郭永勝;騰義衛
• 申請（專利權）人: 新泰市佳禾生物科技有限公司;汕頭市佳禾生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/60
• 分類號: C12N15/60;C12N9/88;C12N15/70
• 代理公司: 濟南譽豐專利代理事務所(普通合伙企業) 37240
• 代理人: 薛鵬喜

1.一種生產水稻色氨酸脫羧酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將SEQ ID NO.1所示的編碼水稻色氨酸脫羧酶的基因TDC連入質粒pEGX-4t-J，獲得重組表達載體；再將獲得的重組表達載體導入大腸桿菌，獲得重組菌；

（2）將重組菌接種至培養基中進行發酵培養，發酵培養至發酵培養液稀釋100倍后的OD₆₀₀值為0.18-0.20，獲得發酵培養液；向發酵培養液中加入誘導劑進行誘導培養，獲得誘導培養物；對誘導培養物進行高壓均質處理，制備得到水稻色氨酸脫羧酶；

步驟（1）中，所述質粒pEGX-4t-J是由如下方法構建而成：

以pEGX-4T-1為出發質粒，利用pflmⅠ和btgⅠ分別將質粒pEGX-4T-1的第3250和4869位點進行酶切，酶切之后再連入長度為100bp的人造鏈；所述質粒pEGX-4t-J的長度為3449bp，僅在第3249位點處存在SpeⅠ酶切位點，僅在第3349位點處存在Bsc91Ⅰ酶切位點。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，所述培養基的組成為：甘油12g/L，酵母膏 5g/L，蛋白胨 5g/L，KH₂PO₄ 2g/L，K₂HPO₄ 15g/L，(NH₄)₂SO₄ 1.5 g/L，MgSO₄ 0.5 g/L，CaCl₂ 0.015 g/L，ZnCl₂ 0.06 g/L。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，發酵培養的條件為：pH控制在7.0，罐壓0.05MPa，溫度33℃，通風比1:1。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，誘導培養的條件為：加入誘導劑IPTG，使IPTG的終濃度100mg/L，誘導溫度22℃，誘導培養時間2-6h。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟（2）中，高壓均質處理的條件為：均質壓力15,000PSI，均質流量400L/Hr，控制溫度為30℃。