[發(fā)明專利]一種原料乳中脂肪酶活力的檢測(cè)方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110707618.1
• 申請(qǐng)日: 2021-06-24
• 公開（公告）號(hào): CN113433085B
• 公開（公告）日: 2022-11-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳柏錫;王琴;曾燕萍;黃艷艷;何剛;沙馬志喜;李斌;胡燕群
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川新華西乳業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/01
• 代理公司: 四川力久律師事務(wù)所 51221
• 代理人: 張浩

本發(fā)明涉及食品分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種原料乳中脂肪酶活力的檢測(cè)方法及其應(yīng)用。該方法通過配制樣品稀釋液和脂肪酶稀釋液；然后加入磷酸緩沖液和底物溶液，得到待測(cè)樣品和加標(biāo)樣品；使用4?硝基苯基辛酸酯為底物，使用脂肪酶粉末配制不同梯度的脂肪酶稀釋液分解底物，產(chǎn)生可吸收316nm波長(zhǎng)的物質(zhì)，并以此建立吸光度?脂肪酶活力函數(shù)關(guān)系；然后通過對(duì)原料乳離心處理，將下清液稀釋后，利用紫外分光光度儀對(duì)待測(cè)樣品和加標(biāo)樣品的吸光度測(cè)試，并通過吸光度?脂肪酶活力函數(shù)關(guān)系判斷原料乳中脂肪酶的活力。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種原料乳中脂肪酶活力的檢測(cè)方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

牛乳中的脂肪酶主要有兩種來源，一種是天然存在于生乳中的，稱為天然脂肪酶，另一種是牛乳中的微生物代謝所產(chǎn)生的，稱為微生物脂肪酶。而牛乳中的微生物脂肪酶主要來源于嗜冷菌，雖然嗜冷菌本身的繁殖不會(huì)嚴(yán)重影響牛乳的穩(wěn)定性，且在較為溫和的熱處理中(如巴氏殺菌)也很容易將其殺死，但某些嗜冷菌的代謝產(chǎn)物是耐熱性的脂肪酶，這些耐熱的脂肪酶在經(jīng)過巴氏殺菌甚至超高溫滅菌后，仍不能被完全滅活。殘留的耐熱脂肪酶會(huì)分解牛乳中的脂肪球膜和脂肪，產(chǎn)生游離的脂肪和脂肪酸，造成滅菌乳脂肪上浮和風(fēng)味異常，嚴(yán)重的破壞了滅菌乳的口感和風(fēng)味，導(dǎo)致滅菌乳的貨架期大幅縮短。所以，在滅菌乳生產(chǎn)的源頭處，結(jié)合原料乳中脂肪酶活力，合理的評(píng)估原料奶的品質(zhì)是十分必要的。

目前脂肪酶活力檢測(cè)的方法種類較多，最常見的是使用動(dòng)態(tài)滴定法進(jìn)行脂肪酶的檢測(cè)，其原理是脂肪酶水解甘油三酯產(chǎn)生脂肪酸，使反應(yīng)體系pH降低，再通過滴定儀補(bǔ)加氫氧化鈉溶液的方式平衡pH，補(bǔ)加氫氧化鈉溶液的速率和脂肪酶活力成正比。該方法存在如下問題：首選該方法需要具備動(dòng)態(tài)滴定的滴定儀，對(duì)于設(shè)備的要求較高，其次該方法較為繁瑣，需要配制大量的試劑且實(shí)驗(yàn)全程耗時(shí)較長(zhǎng)。而且該方法的檢測(cè)限不能夠有效適用脂肪酶活力區(qū)間較低的乳制品，使用該方會(huì)導(dǎo)致線性度較差，結(jié)果偏差較大。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于：本發(fā)明的目的在于針對(duì)當(dāng)前原料乳中脂肪酶檢測(cè)方法不完善，存在耗時(shí)長(zhǎng)、成本高、準(zhǔn)確性差的情況，提供一種原料乳中脂肪酶活力的檢測(cè)方法。使用該方法檢測(cè)結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確，成本低廉且較為快速。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種原料乳中脂肪酶活力的檢測(cè)方法，包括如下步驟；

S1，配置樣品稀釋液，將原料乳脫脂處理，得到下清液；將所述下清液用磷酸緩沖液稀釋，得到樣品稀釋液；配制脂肪酶稀釋液；

S2，待測(cè)樣品和加標(biāo)樣品的制備；

取第一容器，向第一容器中加入磷酸緩沖液，然后加入樣品稀釋液，最后加入底物溶液；混勻，得到待測(cè)樣品；

取第二容器，向第二容器中加入磷酸緩沖液，然后加入樣品稀釋液，加入脂肪酶稀釋液，最后加入底物溶液；混勻，得到加標(biāo)樣品；

第一容器和第二容器中加入的樣品稀釋液的量相同；

所述底物溶液為4-硝基苯基辛酸酯的二甲基亞砜溶液；

S3，預(yù)處理

將待測(cè)樣品水浴孵育，加入終止液，得到待上機(jī)樣品；

將加標(biāo)樣品水浴孵育，加入終止液，得到待上機(jī)加標(biāo)樣品；

待測(cè)樣品和加標(biāo)樣品中加入的終止液的量相同；

S4，檢測(cè)

檢測(cè)待上機(jī)樣品在316nm處的吸光度Y_樣品以及待上機(jī)加標(biāo)樣品在316nm處的吸光度Y_{加標(biāo)}，根據(jù)脂肪酶活力計(jì)算值-吸光度的關(guān)系式計(jì)算得到待測(cè)樣品的脂肪酶活力計(jì)算值和加標(biāo)樣品的脂肪酶活力計(jì)算值；

脂肪酶活力計(jì)算值-吸光度的關(guān)系式為，