[發(fā)明專利]一種原料乳中脂肪酶活力的檢測(cè)方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110707618.1
• 申請(qǐng)日: 2021-06-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113433085B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-11-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳柏錫;王琴;曾燕萍;黃艷艷;何剛;沙馬志喜;李斌;胡燕群
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川新華西乳業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N21/01
• 代理公司: 四川力久律師事務(wù)所 51221
• 代理人: 張浩

1.一種原料乳中脂肪酶活力的檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟；

S1，配置樣品稀釋液，將原料乳脫脂處理，得到下清液；將所述下清液和磷酸緩沖液按照體積比為1：7-1:9混合，得到樣品稀釋液；配制脂肪酶稀釋液；

S2，待測(cè)樣品和加標(biāo)樣品的制備；

取第一容器，向第一容器中加入磷酸緩沖液，然后加入樣品稀釋液，最后加入底物溶液；混勻，得到待測(cè)樣品；

取第二容器，向第二容器中加入磷酸緩沖液，然后加入樣品稀釋液，加入脂肪酶稀釋液，最后加入底物溶液；混勻，得到加標(biāo)樣品；第一容器和第二容器中加入的樣品稀釋液的量相同；所述底物溶液為4-硝基苯基辛酸酯的二甲基亞砜溶液；

S3，預(yù)處理

將待測(cè)樣品水浴孵育，加入終止液，得到待上機(jī)樣品；

將加標(biāo)樣品水浴孵育，加入終止液，得到待上機(jī)加標(biāo)樣品；

待測(cè)樣品和加標(biāo)樣品中加入的終止液的量相同；所述終止液為乙腈和甲酸的混合物；

S4，檢測(cè)

檢測(cè)待上機(jī)樣品在316nm處的吸光度Y_樣品以及待上機(jī)加標(biāo)樣品在316nm處的吸光度Y_{加標(biāo)}，根據(jù)脂肪酶活力計(jì)算值-吸光度的關(guān)系式計(jì)算得到待測(cè)樣品的脂肪酶活力計(jì)算值和加標(biāo)樣品的脂肪酶活力計(jì)算值；

脂肪酶活力計(jì)算值-吸光度的關(guān)系式為，Y_吸光度＝KX_酶活力 +B；

式中，Y_吸光度為待上機(jī)測(cè)試溶液的吸光度，X_酶活力為待測(cè)溶液的脂肪酶活力計(jì)算值，單位為mU/mL；其中待測(cè)溶液經(jīng)過(guò)水浴孵育加入終止液后，得到待上機(jī)測(cè)試溶液；K和B為系數(shù)；

計(jì)算回收率，回收率計(jì)算公式為：R_回收率=（X_{加標(biāo)}-X_樣品）*100%/C；

式中，X_樣品為待測(cè)樣品的脂肪酶活力計(jì)算值，單位為mU/mL；X_{加標(biāo)}為加標(biāo)樣品的脂肪酶活力計(jì)算值，單位為mU/mL；C為加標(biāo)量，單位為mU/mL；

再利用回收率計(jì)算待測(cè)樣品中脂肪酶活力真實(shí)值，脂肪酶活力真實(shí)值計(jì)算公式為：A_{真實(shí)值}=X_樣品/R_回收率；式中A_{真實(shí)值}是指待測(cè)樣品中的脂肪酶活力真實(shí)值，單位為mU/mL;

其中，步驟S4中脂肪酶活力計(jì)算值-吸光度的關(guān)系式Y(jié)_吸光度=K X_酶活力+B，經(jīng)過(guò)如下步驟獲得；

取多個(gè)容器，分別向每個(gè)容器中加入相同量的磷酸緩沖液，然后向每個(gè)容器中分別加入不同量的脂肪酶稀釋液，然后向每個(gè)容器中加入底物溶液；得到多個(gè)不同脂肪酶濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品；

將多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品水浴孵育，然后向多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品分別加入終止液，得到多個(gè)待上機(jī)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品；分別測(cè)試每個(gè)待上機(jī)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品在316nm處的吸光度，獲得不同脂肪酶濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線的吸光度，擬合一次回歸方程，得到脂肪酶活力計(jì)算值-吸光度的關(guān)系式中的K和B的數(shù)值。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原料乳中脂肪酶活力的檢測(cè)方法，其特征在于，回收率計(jì)算公式，R_回收率=（X_{加標(biāo)}-X_樣品）*100%/C；其中C的值為10mU/mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的原料乳中脂肪酶活力的檢測(cè)方法，其特征在于，所述終止液中乙腈和甲酸的體積比為12:1。