[發明專利]一種浮萍瞬時轉化方法

有效

• 申請號: 202110706250.7
• 申請日: 2021-06-24
• 公開（公告）號: CN113462716B
• 公開（公告）日: 2023-07-25
• 發明（設計）人: 楊琳;馬旭;王珅;孫津歌
• 申請（專利權）人: 天津師范大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;C12N15/65;A01H5/00
• 代理公司: 天津創智睿誠知識產權代理有限公司 12251
• 代理人: 李薇

本發明提供了一種浮萍瞬時轉化方法，包括以下步驟：采集浮萍；采集到的浮萍在液體培養基上進行繼代培養；活化并提取帶有熒光標記目的基因的農桿菌；制備含有Silwet?775和蔗糖的溶菌液；將帶有熒光標記目的基因的農桿菌加入溶菌液中，使菌體完全溶解于溶菌液中，裂解農桿菌使得質粒被釋放出來；挑取完整浮萍，用針頭在浮萍葉片背面扎一個小孔后將浮萍放入的溶菌液中浸泡侵染，將侵染后的浮萍放入浮萍液體培養基中并進行暗培養，得到瞬時侵染浮萍。本發明中農桿菌瞬時侵染浮萍的方法主要采用針扎法，具有易操作、時間短、成本低等特點，可應用于浮萍分子生物學、生物反應器構建和熒光標記等相關理論與應用研究中。

技術領域

本發明涉及植物瞬時轉化技術領域，特別是涉及一種浮萍瞬時轉化方法。

背景技術

浮萍是單子葉水面漂浮植物，隸屬于浮萍科浮萍屬，廣布于世界各地，其個體小，擴繁快，對環境的適應能力強，對鹽堿水環境有一定的抗性，對重金屬鎘離子有富集能力。但是，對于浮萍富集重金屬的生理機制和分子機制尚未闡明。通過制備浮萍瞬時轉化體系，利用正置顯微鏡觀察等技術，這將對重金屬污染水境的生態學修復和植物抗重金屬應用具有重要的價值和意義。

浮萍常規轉化方法主要是農桿菌轉化法，侵染時間需要花費1-2月，時間較長，從愈傷組織到再分化為完整浮萍的難度大。這造成了侵染效率很低。建立轉化效率高、穩定傳代的侵染方法是構建轉基因浮萍亟待解決的問題。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中存在的缺乏浮萍瞬時轉化體系的問題，而提供一種浮萍瞬時轉化方法。

為實現本發明的目的所采用的技術方案是：

一種浮萍瞬時轉化方法，包括以下步驟：

步驟1，采集浮萍；

步驟2，采集到的浮萍在液體培養基上進行繼代培養；

步驟3，活化并提取帶有熒光標記目的基因的農桿菌；

步驟4，制備含有Silwet-775和蔗糖的溶菌液；

步驟5，將步驟3得到的帶有熒光標記目的基因的農桿菌加入步驟4得到的溶菌液中，使菌體完全溶解于溶菌液中，裂解農桿菌使得質粒被釋放出來；

步驟6，挑取步驟2得到的完整浮萍，用針頭在浮萍葉片背面扎一個小孔后將浮萍放入步驟5得到的溶菌液中浸泡侵染，將侵染后的浮萍放入浮萍液體培養基中并進行暗培養，得到瞬時侵染浮萍。

在上述技術方案中，所述步驟1的浮萍為浮萍科浮萍屬L.minor。

在上述技術方案中，所述步驟2的繼代培養方法為：將浮萍培養于液體培養基上，培養條件為23-25℃，光周期為16-18小時/天，光強為95-100μmol?m^-2s^-1，每周繼代一次。