[發(fā)明專利]一種人類骨髓、臍帶血干細胞處理試劑盒及干細胞分離方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110701872.0
• 申請日: 2021-06-24
• 公開（公告）號: CN113308436A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發(fā)明（設計）人: 唐明淇
• 申請（專利權）人: 海南賽奧干細胞生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種人類骨髓、臍帶血干細胞處理試劑盒，所述的干細胞處理試劑盒由1號液、2號液組成，所述百分比(％)均為重量百分比(W/W)，密度單位：g/ml，1號液、2號液的溶劑均為水；1號液：0.1％?30％羥乙基淀粉或0.1％?30％甲基纖維素；2號液：由聚蔗糖和泛影葡胺配制成的密度為1.0?1.2g/ml的分層液組成。在本發(fā)明實施過程中，能夠縮短反應時間，且本方案中所用的試劑更少，所得到的干細胞數(shù)量更多。

技術領域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學技術應用技術領域，具體為一種人類骨髓、臍帶血干細胞處理試劑盒及干細胞分離方法。

背景技術

現(xiàn)有技術中，用于人類血液細胞分離的方法包括免疫磁珠法、流式細胞儀法、血細胞分離機法和培養(yǎng)擴增法等方法。

免疫磁珠法

將已知的抗體包被在磁珠微粒上，使磁珠微粒與人類血液混合。呈抗原抗體陽性的細胞粘附在磁珠上，通過一條磁性管道，磁珠被吸附在管壁上；其它沒有結合磁珠的細胞都流走后，去除管道磁性，搜集所有含有磁珠的細胞。存在問題：造價高，中低收入患者不適用。對細胞本身活性有損傷，影響細胞治療療效。

流式細胞儀法

分選原理：流式細胞計的分選功能是由細胞分選器完成的。

總的過程：由噴嘴射出的液柱被分割成一連串的小水滴，根據(jù)選定的某個參數(shù)由邏輯電路判明是否將被分選，而后由充電電路對選定細胞液滴充電，帶電液滴攜帶細胞通過靜電場而發(fā)生偏轉，落入收集器中；其它液體被當作廢液抽吸掉，某些類型的儀器也有采用捕獲管來進行分選的。存在問題，一臺流式細胞儀造價300-500萬元，標記用抗體1500-5000元一支，造價高，標記物有致癌性，應用于臨床不安全，只能適用于科研。

血細胞分離機法

主要用于分離外周血，先給患者注射動員劑，然后使患者外周血經(jīng)過血細胞分離機循環(huán)過濾，得到一定范圍直徑的細胞，用于細胞治療。存在問題：打動員劑增加治療負擔，分離后細胞液體積過大，患者承擔一定的生命危險。

培養(yǎng)擴增法

采集人類血液后，加入試劑置于培養(yǎng)箱擴增，1周后清洗使用。存在問題：污染率高，干細胞向未知方向分化為未知干細胞，時間長。

現(xiàn)有技術中，已經(jīng)公開的涉及骨髓和血液分離專利文獻：

申請?zhí)枺?00510130326.7，名稱：一種分離細胞的方法及專用細胞分離液。該分離細胞的方法缺點：上述方法針對雞，牛，人血液需要做各種調(diào)整，準確度堪憂，由于添加了表面活性劑，分離出的細胞未知，只能用于簡單的細胞試驗使用。

申請?zhí)枺?00610035900.5，名稱：一種干細胞分離液及其用于干細胞分離的方法。該干細胞分離液和干細胞分離的方法的缺點：需要配制工作液，需要調(diào)節(jié)密度，只能搜集密度在1.083g/ml范圍內(nèi)的細胞，即搜集到的細胞較雜，而可用于治療所需要的目標細胞數(shù)量少，并且對于臍帶血來說，使用該方法去除紅細胞不凈，最終臨床應用的時候會導致患者產(chǎn)生排異反應。

申請?zhí)枺?00610114475.9名稱：用于分離骨髓單個核細胞的試劑盒：使用該試劑盒的缺點：使用該試劑盒直接分離血液中的干細胞，數(shù)量不足以臨床治療使用，所以該方法進行了細胞培養(yǎng)，培養(yǎng)的細胞污染率高，體外模擬體內(nèi)環(huán)境使細胞擴增，導致培養(yǎng)出的細胞有形態(tài)沒功能，不能用于臨床治療。

申請?zhí)枺?00610106875.5名稱：一種有核細胞體外分離試劑盒及其應用方法。缺點：此試劑盒及其應用方法所用的HISTOPAGUE 1077為密度1.077g/ml的淋巴細胞分離液，經(jīng)此分離后的細胞絕大多數(shù)為淋巴細胞，這樣導致細胞中能夠用于治療的干細胞占少數(shù)，影響臨床療效。