[發明專利]尿液中18-羥皮質醇的檢測方法

有效

• 申請號: 202110698650.8
• 申請日: 2021-06-23
• 公開（公告）號: CN113433234B
• 公開（公告）日: 2023-04-07
• 發明（設計）人: 趙蓓蓓;佘旭輝;饒夢華;梁嘉威;董衡;李卓陽
• 申請（專利權）人: 廣州金域醫學檢驗中心有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香;曾銀鳳

本發明涉及一種尿液中18?羥皮質醇的檢測方法。本發明的檢測方法包括以下步驟：樣品前處理：取尿液樣本，與18?羥皮質醇穩定同位素內標的工作液混合，再在所得混合液中加水稀釋，混合后離心，取上清液作為待測樣品溶液，注入高效液相色譜串聯質譜儀測定18?羥皮質醇的含量。本發明的檢測方法前處理簡單、快速、特異性強、試劑耗材成本低、易于規模化操作。

技術領域

本發明涉及18-羥皮質醇檢測的技術領域，特別是涉及尿液中18-羥皮質醇的檢測方法。

背景技術

原發性醛固酮增多癥(Primary?aldosteronism，PA)，簡稱原醛癥，指腎上腺皮質球狀帶分泌過量的醛固酮而導致腎素-血管緊張素系統受抑制，導致潴鈉排鉀、血容量增多，以高血壓伴有或不伴有低血鉀為主要臨床表現的綜合癥。原醛癥是繼發性高血壓的常見病因之一，在高血壓人群中的發病率為10％左右。研究發現醛固酮過多會導致心肌肥厚、心力衰竭和腎功能受損。原醛癥主要分為6個亞型，其中醛固酮瘤(aldosterone-producingadenoma，APA)和雙側腎上腺增生(Bilateral?Adrenal?Hyperplasia?BAH)是占比較大的兩種亞型，分別占35％和60％。

國外在臨床研究原醛癥時發現，尿液18-羥皮質醇(18-hydroxycortisol，18-OHF)的含量在糖皮質激素可抑制性醛固酮增多癥(glucocorticoid?suppressiblehyperaldosteronism，GSH)、APA和BAH上無明顯重疊。因此18-OHF的測定有助于PA亞型的鑒別診斷，被認為是區分APA、GSH和其他亞型的新型標志物，同時還可作為APA的手術治療效果評估的指標。

18-OHF的傳統檢測方法有氣相色譜質譜法(GC-MS)、放射免疫法(RIA)、酶聯免疫法(EIA)、時間分辨熒光法和高效液相色譜法(HPLC)，這些方法都存在前處理過程復雜且步驟繁瑣，檢測結果抗干擾能力差、檢測耗時長、檢測成本高等缺點。近年來，液相色譜串聯質譜法(liquid?chromatography?tandem?mass?spectrometry,LC-MS/MS)也被運用于檢測18-羥皮質醇18-OHF，相較于傳統檢測方法，液相色譜串聯質譜法檢測18-羥皮質醇具有靈敏度低、成本低、耗時短等優點。為去除樣品蛋白干擾，檢測前需要對樣品進行前處理除雜，而目前已發表文獻中所報道的前處理方法普遍為固相萃取法(Solid?Phase?Extraction,SPE)，但SPE方法存在步驟多、操作復雜、耗時長、試劑耗材成本高和污染環境等問題。

此外，18-OHF和6β-羥皮質醇都是人體內自然存在的化合物，兩者具有相同的分子量，互為同分異構體，定量檢測18-OHF時容易被內源性同分異構體6β-羥皮質醇干擾，導致18-OHF難以準確定量檢測，因此需要開發出一種快速區分兩種化合物以實現18-OHF準確定量檢測的分析方法。

因此本領域技術人員迫切解決的一個技術問題就是：如何針對18-OHF，提供一種前處理簡單、快速、特異性強、試劑耗材成本低、易于規模化操作的檢測方法。

發明內容

基于此，本發明的目的是提供一種前處理簡單、快速、特異性強、試劑耗材成本低、易于規模化操作的尿液中18-羥皮質醇的檢測方法。

具體技術方案如下：

尿液中18-羥皮質醇的檢測方法，包括以下步驟：

樣品前處理：取尿液樣本，與18-羥皮質醇穩定同位素內標的工作液混合，再在所得混合液中加入水稀釋，混合后離心，取上清液作為待測樣品溶液，注入高效液相色譜串聯質譜儀測定18-羥皮質醇的含量。

在其中一些實施例中，所述18-羥皮質醇穩定同位素內標的工作液的溶劑為甲醇、乙腈或乙醇。

在其中一些實施例中，所述18-羥皮質醇穩定同位素內標的工作液的溶劑為甲醇。