[發明專利]能夠用于培養PRRSV獲得高病毒含量病毒液的Marc-145細胞株的篩選方法

在審

• 申請號: 202110697711.9
• 申請日: 2021-06-23
• 公開（公告）號: CN113406337A
• 公開（公告）日: 2021-09-17
• 發明（設計）人: 孔彩平;朱旭;俎紅麗;趙麗霞;李敏;烏日罕;劉燕軍;孫慧;王娥娥;郝蘇云;韓冬;張海寶;喬煜婷;郝鵬
• 申請（專利權）人: 金宇保靈生物藥品有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;C12N5/071
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 葉占洋;魯兵

1.一種能夠用于培養PRRSV獲得高病毒含量病毒液的Marc-145細胞株的篩選方法，其包括以下步驟：

檢測：利用間接免疫熒光法檢測由候選Marc-145單克隆細胞株繁殖形成的Marc-145單克隆細胞群中細胞表面存在CD163受體的細胞占Marc-145細胞群的百分比；

篩選：將所述百分比≥50％對應的候選Marc-145單克隆細胞株作為能夠用于培養PRRSV獲得高病毒含量病毒液的Marc-145細胞株；

其中所述高病毒含量病毒液是指病毒含量≥10^7.0TCID₅₀/ml的病毒液。

2.根據權利要求1所述的篩選方法，其中篩選標準更優為：所述百分比≥80％，所述高病毒含量病毒液中病毒含量≥10^8.0TCID₅₀/ml。

3.根據權利要求1或2所述的篩選方法，其中所述細胞表面存在CD163受體的細胞為利用間接免疫熒光法檢測到的細胞表面出現特異性熒光的細胞。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的篩選方法，其中所述候選Marc-145單克隆細胞株為候選Marc-145單克隆貼壁細胞株或候選Marc-145單克隆懸浮細胞株，由所述候選Marc-145單克隆貼壁細胞株繁殖形成的細胞群為Marc-145單克隆貼壁細胞群，由所述候選Marc-145單克隆懸浮細胞株繁殖形成的細胞群為Marc-145單克隆懸浮細胞群。

5.根據權利要求4所述的篩選方法，其中由所述候選Marc-145單克隆貼壁細胞株繁殖形成Marc-145單克隆貼壁細胞群的具體操作為：

將所述候選Marc-145單克隆貼壁細胞株按照1個細胞/孔接種于細胞培養板，置于37±1℃5％CO₂的條件下用含10％新生牛血清的DMEM培養基培養7～14天，得到Marc-145單克隆貼壁細胞群。

6.根據權利要求4所述的篩選方法，其中由所述候選Marc-145單克隆懸浮細胞株繁殖形成Marc-145單克隆懸浮細胞群的具體操作為：

將所述候選Marc-145單克隆懸浮細胞株按照1個細胞/板接種于半固體瓊脂糖平板中，置于37±1℃5％CO₂的條件下用CD293培養基培養7～14天，得到Marc-145單克隆懸浮細胞群。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的篩選方法，其中所述間接免疫熒光法中所使用的一抗為抗CD163單克隆抗體，使用的二抗為FITC標記羊抗鼠IgG二抗。

8.一種利用Marc-145細胞群培養PRRSV獲得的病毒液中病毒含量的預測方法，其包括利用間接免疫熒光法檢測所述Marc-145細胞群中細胞表面存在CD163受體的細胞占Marc-145細胞群的百分比，通過該百分比數值預測病毒液中病毒含量；

預測判斷標準為：

若所述Marc-145細胞群中細胞表面存在CD163受體的細胞占比達到50％，則利用該Marc-145細胞群培養PRRSV獲得的病毒液中病毒含量平均值不低于10^7.0TCID₅₀/ml；

若所述Marc-145細胞群中細胞表面存在CD163受體的細胞占比達到80％，則利用該Marc-145細胞群培養PRRSV獲得的病毒液中病毒含量平均值不低于10^8.0TCID₅₀/ml；

若所述Marc-145細胞群中細胞表面存在CD163受體的細胞占比低于40％，則利用該Marc-145細胞群培養PRRSV獲得的病毒液中病毒含量平均值低于10^7.0TCID₅₀/ml。