[發明專利]一種無菌冬蟲夏草寄主幼蟲的產業化飼養方法

有效

• 申請號: 202110696567.7
• 申請日: 2021-06-23
• 公開（公告）號: CN113455468B
• 公開（公告）日: 2023-02-10
• 發明（設計）人: 柴文敏;毛先兵;卜俊熙;卜京
• 申請（專利權）人: 重慶欣時達生物技術有限公司
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033;A23K50/90;A23K10/30;A01G18/00;A01G18/20
• 代理公司: 重慶德創至道知識產權代理事務所(普通合伙) 50245
• 代理人: 陳先權

1.一種無菌冬蟲夏草寄主幼蟲的產業化飼養方法，其特征在于：包括以下步驟，

S1、蟲卵的無菌處理，將蝙蝠蛾科昆蟲交尾卵放置在無菌卵消毒裝置內，所述的無菌卵消毒裝置包括盛放消毒液的液體槽(1)、盛放蟲卵的雙層濾膜網(2)、無菌水噴灑裝置(3)，所述雙層濾膜網(2)通過豎直升降支架設置在所述液體槽(1)上方，所述無菌水噴灑裝置(3)設置在所述雙層濾膜網(2)上方，所述雙層濾膜網向下滑動可完全浸沒在所述液體槽(1)內的消毒液中，用濃度為100-300ppm的含氯消毒液浸沒消毒5-20分鐘，取出，無菌水沖洗盡蟲卵表面的消毒劑，得無菌蟲卵；

S2、侵染裝置的制備，取透明玻璃容器作為侵染盒，侵染盒上設置可密封連接的上蓋，上蓋上開設透氣孔，在透氣孔位置設置有無菌濾膜，將侵染盒及上蓋進行滅菌處理；

S3、添加無菌飼料，定量稱取植物塊莖粉、珠芽蓼粉、瓊脂、水混合，加熱溶解，傾倒入步驟S2制備的侵染盒中，高壓蒸汽滅菌，待冷卻凝固得到含固體培養基的侵染盒；

S4、制備無菌幼蟲飼養瓶，所述無菌飼養瓶包括可密封扣合的瓶身和瓶蓋，所述瓶身為直徑為5cm、高度為5cm的透明瓶，所述瓶蓋上設置有直徑為1cm的透氣孔，所述透氣孔處設置微生物過濾透氣膜，按照步驟S3的方式制備含固體培養基的無菌幼蟲飼養瓶；

S5、將步驟S1中得到的無菌卵在無菌室內放置在步驟S3中的侵染盒中，每個侵染盒放入500粒無菌蟲卵，待卵孵化幼蟲1-3個月內可連接菌種發酵裝置將冬蟲夏草菌的發酵液通過總管道直接輸入到侵染盒中，采用霧狀噴灑的方式均勻散布侵染盒中，使得菌種發酵液接觸到無菌幼蟲體表和幼蟲取食的無菌飼料，充分侵染；

S6、把步驟S5中侵染1-3個月后的幼蟲按單只分別轉移至步驟S4中制得的無菌飼養瓶中，所述無菌飼養瓶中盛裝有15-30毫升無菌飼料，每2-4個月轉移一次新的無菌飼養瓶直到幼蟲發育為僵蟲。

2.根據權利要求1所述的一種無菌冬蟲夏草寄主幼蟲的產業化飼養方法，其特征在于：步驟S3中的植物塊莖粉為胡蘿卜粉、蕨麻粉一種或兩種組合。

3.根據權利要求2所述的一種無菌冬蟲夏草寄主幼蟲的產業化飼養方法，其特征在于：步驟S3中的無菌飼料成分配比為每100毫升水中添加瓊脂1-1.5克、胡蘿卜粉3-5克、蕨麻粉2.5-3.5克、珠芽蓼粉1.5-2.5克，調節Ph6.0-6.5。

4.根據權利要求3所述的一種無菌冬蟲夏草寄主幼蟲的產業化飼養方法，其特征在于：步驟S3中的無菌飼料成分配比為每100毫升水中添加瓊脂1-1.5克、胡蘿卜粉3-5克、蕨麻粉2.5-3.5克，調節Ph6.0-6.5。

5.根據權利要求3所述的一種無菌冬蟲夏草寄主幼蟲的產業化飼養方法，其特征在于：步驟S3中的無菌飼料成分配比為每100毫升水中添加瓊脂1-1.5克、胡蘿卜粉3-5克、珠芽蓼粉1.5-2.5克，調節Ph6.0-6.5。

6.根據權利要求1所述的一種無菌冬蟲夏草寄主幼蟲的產業化飼養方法，其特征在于：步驟S3和S4中采用的高蒸汽滅菌工藝為將侵染盒或幼蟲飼養瓶放入高壓蒸汽滅菌鍋中，在103kpa，121攝氏度條件下滅菌45分鐘。

7.根據權利要求1所述的一種無菌冬蟲夏草寄主幼蟲的產業化飼養方法，其特征在于：步驟S5中的冬蟲夏草菌的發酵液配方為：100毫升水中添加葡萄糖1.5-3.5克、牛奶10-15毫升、硫酸鎂0.005-0.01克、磷酸二氫鉀0.005-0.01克、磷酸氫二鉀0.005-0.01克。