[發(fā)明專利]一種高效的外泌體分離純化方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202110695490.1 | 申請(qǐng)日： | 2021-06-23 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN113249302B | 公開（公告）日： | 2021-10-08 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張怡然;顧麗清;段小紅;陳玉潔;王麗芬;周啟明 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 北京求臻醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12N5/071 | 分類號(hào)： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 重慶百潤洪知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50219 | 代理人： | 陳付玉 |
| 地址： | 100000 北京市經(jīng)濟(jì)技術(shù)*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 高效 外泌體 分離 純化 方法 | ||
1.一種高效的外泌體分離純化方法，其特征在于包括以下步驟：
S1. 向體液中加入陽離子多聚物，在2-10℃孵育5-30 min；所述陽離子多聚物為多聚賴氨酸；
S2. 將體液混合物過濾后，截留物依次加入低濃度離液劑、高濃度離液劑進(jìn)行洗脫，得到外泌體初分離物；
S3. 將外泌體初分離物中加入磁性吸附劑，在15-35℃孵育2-20 min后，去除清液，取出磁性吸附劑；其中，磁性吸附劑為包裹有二氧化鈦的磁珠；所述低濃度離液劑為0.5-2.5M異硫氰酸胍，所述高濃度離液劑為4-6M異硫氰酸胍；
S4. 向磁性吸附劑加入洗脫劑重懸，在15-35℃孵育2-20 min后，取出清液，得到高純度外泌體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效的外泌體分離純化方法，其特征在于：所述體液包括非人新生體的血液、血漿或血清。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種高效的外泌體分離純化方法，其特征在于：S2中采用孔徑為0.1-0.3 μm濾膜過濾。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效的外泌體分離純化方法，其特征在于：S4中所述洗脫劑為濃度為5-25%氨水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高效的外泌體分離純化方法，其特征在于：S4中磁性吸附劑重懸前先用PBS漂洗。
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