[發(fā)明專利]一種高效的外泌體分離純化方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110695490.1 | 申請日: | 2021-06-23 |
| 公開(公告)號: | CN113249302B | 公開(公告)日: | 2021-10-08 |
| 發(fā)明(設計)人: | 張怡然;顧麗清;段小紅;陳玉潔;王麗芬;周啟明 | 申請(專利權)人: | 北京求臻醫(yī)學檢驗實驗室有限公司 |
| 主分類號: | C12N5/071 | 分類號: | C12N5/071 |
| 代理公司: | 重慶百潤洪知識產權代理有限公司 50219 | 代理人: | 陳付玉 |
| 地址: | 100000 北京市經濟技術*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 高效 外泌體 分離 純化 方法 | ||
1.一種高效的外泌體分離純化方法,其特征在于包括以下步驟:
S1. 向體液中加入陽離子多聚物,在2-10℃孵育5-30 min;所述陽離子多聚物為多聚賴氨酸;
S2. 將體液混合物過濾后,截留物依次加入低濃度離液劑、高濃度離液劑進行洗脫,得到外泌體初分離物;
S3. 將外泌體初分離物中加入磁性吸附劑,在15-35℃孵育2-20 min后,去除清液,取出磁性吸附劑;其中,磁性吸附劑為包裹有二氧化鈦的磁珠;所述低濃度離液劑為0.5-2.5M異硫氰酸胍,所述高濃度離液劑為4-6M異硫氰酸胍;
S4. 向磁性吸附劑加入洗脫劑重懸,在15-35℃孵育2-20 min后,取出清液,得到高純度外泌體。
2.根據權利要求1所述的一種高效的外泌體分離純化方法,其特征在于:所述體液包括非人新生體的血液、血漿或血清。
3. 根據權利要求1或2所述的一種高效的外泌體分離純化方法,其特征在于:S2中采用孔徑為0.1-0.3 μm濾膜過濾。
4.根據權利要求1所述的一種高效的外泌體分離純化方法,其特征在于:S4中所述洗脫劑為濃度為5-25%氨水。
5.根據權利要求1所述的一種高效的外泌體分離純化方法,其特征在于:S4中磁性吸附劑重懸前先用PBS漂洗。
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