[發明專利]鄰苯二酚雙加氧酶突變體、重組載體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202110693671.0
• 申請日: 2021-06-22
• 公開（公告）號: CN113308444A
• 公開（公告）日: 2021-08-27
• 發明（設計）人: 江晶潔;馬富強;張藝凡;岳婕;楊廣宇
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 賀杰

1.一種突變型鄰苯二酚雙加氧酶，其特征在于，所述突變型鄰苯二酚雙加氧酶為如下(a1)或(a2)：

(a1)由SEQ ID No.2所示的氨基酸序列經缺失、替代或增加一個或多個氨基酸得到的與SEQ ID No.2所示的氨基酸序列組成的多肽具有相同功能的多肽；

(a2)與SEQ ID No.2所示的氨基酸序列組成的多肽具有至少90％同源性的多肽。

2.根據權利要求1所述的突變型鄰苯二酚雙加氧酶，其特征在于，所述突變型鄰苯二酚雙加氧酶是在SEQ ID No.2所示的氨基酸序列上進行突變得到的，突變位點選自A95V、L148S、R193Q、L248D中的一種或一種以上的組合。

3.根據權利要求1所述的突變型鄰苯二酚雙加氧酶，其特征在于，所述突變位點為A95V、L148S、R193Q、L248D、A95V-L148S、L148S-R193Q、A95V-L248D、R193Q-L248D、A95V-R193Q、L148S-L248D、A95V-L148S-R193Q、A95V-L148S-L248D、A95V-R193Q-L248D、L148S-R193Q-L248D或A95V-L148S-R193Q-L248D。

4.根據權利要求1所述的突變型鄰苯二酚雙加氧酶，其特征在于，A95V單位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；

L148S單位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示；

R193Q單位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；

L248D單位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ ID No.6所示；

A95V-L148S組合位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ IDNo.7所示；

L148S-R193Q組合位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ IDNo.8所示；

A95V-L248D組合位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ IDNo.9所示；

R193Q-L248D組合位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ IDNo.10所示；

A95V-R193Q組合位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ IDNo.11所示；

L148S-L248D組合位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ IDNo.12所示；

A95V-L148S-R193Q組合位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQID No.13所示；

A95V-L148S-L248D組合位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQID No.14所示；

A95V-R193Q-L248D組合位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQID No.15所示；

L148S-R193Q-L248D組合位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ ID No.16所示；

A95V-L148S-R193Q-L248D組合位點突變對應的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的氨基酸序列如SEQ ID No.17所示。

5.一種編碼如權利要求1-3中任意一項所述的突變型鄰苯二酚雙加氧酶的基因，該基因為如下(b1)或(b2)：

(b1)由SEQ ID No.1所示的核苷酸序列缺失、替代或增加一個或多個堿基得到的多核苷酸；

(b2)與SEQ ID No.1所示的核苷酸序列組成的多核苷酸具有至少90％同源性的多核苷酸。