[發(fā)明專利]一種哌尼生素前體、表達(dá)盒及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110688531.4
• 申請日: 2021-06-21
• 公開（公告）號: CN113354718B
• 公開（公告）日: 2023-06-02
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 蘇國旗;黃升;陳利;江山;周曉容;楊飛云;黃金秀
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶市畜牧科學(xué)院
• 主分類號: C07K14/195
• 分類號: C07K14/195;C12N15/75;C12N1/21;C12R1/125
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責(zé)任公司 50209
• 代理人: 文巍

1.一種哌尼生素Penisin表達(dá)盒，用于編碼上述哌尼生素Penisin前體，從5’端到3’端penA1蛋白編碼基因penA1、penB蛋白編碼基因penB、penT蛋白編碼基因penT、penC蛋白編碼基因penC、penD蛋白編碼基因penD依次串聯(lián)排列。

2.如權(quán)利要求1所述的哌尼生素Penisin表達(dá)盒，采用三段克隆片段，片段1為penA1編碼基因，片段2為penB蛋白編碼基因和penT蛋白編碼基因，片段3為penC蛋白編碼基因和penD蛋白編碼基因。

3.如權(quán)利要求2所述的哌尼生素Penisin表達(dá)盒，采用in-fusion克隆擴增技術(shù)，采用引物P1和P2克隆片段1，P3和P4克隆片段2，P5和P6克隆片段3；還包括啟動子，啟動子的3’端連接penA1蛋白編碼基因penA1，所述啟動子為P43啟動子。

4.如權(quán)利要求1、2或3所述哌尼生素Penisin表達(dá)盒，所述哌尼生素前體氨基酸序列為SEQ?ID?NO.2。

5.如權(quán)利要求1、2或3所述的哌尼生素Penisin表達(dá)盒，序列為SEQ?ID?NO.1。

6.一種表達(dá)載體或基因工程菌，包括權(quán)利要求1-5任一表達(dá)盒，所述表達(dá)載體為pP43NMK表達(dá)載體；所述基因工程菌為枯草芽孢桿菌。

7.一種哌尼生素Penisin的制備方法，包括以下步驟：

（1）用引物將基因penA1、penBT、penCD克隆形成三個片段；

（2）通過?In-fusion?克隆技術(shù)將?penA1、penBT、penCD基因片段連接于表達(dá)載體，與載體上的啟動子和信號肽基因連接后形成penA1BTCD表達(dá)盒；

（3）將帶有penA1BTCD表達(dá)盒的pP43NMK重組載體轉(zhuǎn)化入基因工程菌枯草芽孢桿菌中篩選陽性重組子，在培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)，提取發(fā)酵液中分泌蛋白。

8.如權(quán)利要求7所述哌尼生素的制備方法，哌尼生素表達(dá)量為0.5～1?g/L。

9.如權(quán)利要求7所述哌尼生素的制備方法，所述基因工程菌的培養(yǎng)基為：豆粕粉1%，酵母粉1%，蛋白胨1%，葡萄糖1%，氯化鈉0.5%。