[發(fā)明專利]一種促進大腸桿菌周質(zhì)表達單域抗體的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110687609.0 | 申請日： | 2021-06-21 |
| 公開（公告）號： | CN113502309B | 公開（公告）日： | 2023-02-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 畢允晨;鄧鵬輝;王淏 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學院海洋研究所 |
| 主分類號： | C12P21/00 | 分類號： | C12P21/00;C07K16/40;C12N15/13;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 山東三邦知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37308 | 代理人： | 高洋;牛繼梅 |
| 地址： | 266071 *** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 促進 大腸桿菌 表達 抗體 方法 | ||
1.一種促進大腸桿菌周質(zhì)表達單域抗體的方法，其特征在于，步驟如下：
（1）將轉(zhuǎn)化有單域抗體基因的重組大腸桿菌培養(yǎng)至OD600為1.0-1.2；
（2）將步驟（1）培養(yǎng)后的重組大腸桿菌進行0℃冰激處理，處理5-10 min；
（3）向步驟（2）處理后的重組大腸桿菌中添加終濃度為10 μg/mL-80 μg/mL的IPTG；10-16℃誘導培養(yǎng)，促進單域抗體在大腸桿菌周質(zhì)表達；
所述重組大腸桿菌中轉(zhuǎn)化有單域抗體基因的重組表達載體；所述重組表達載體上包含信號肽PelB序列、單域抗體基因序列、6×His標簽序列；
所述單域抗體為鯊源單域抗體，由鯊源單域抗體基因表達而成；所述鯊源單域抗體基因來源于條紋斑竹鯊，其核酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述鯊源單域抗體為抗透明質(zhì)酸合成酶抗體，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進大腸桿菌周質(zhì)表達單域抗體的方法，其特征在于，所述IPTG的終濃度為10 μg/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進大腸桿菌周質(zhì)表達單域抗體的方法，其特征在于，所述誘導培養(yǎng)溫度為16℃。
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